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标题:[求助]复方氨基酸分析

wsll[使用道具]
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使用的DABS Cl 柱前衍生,普通C18柱,紫外检测器,流动相A:0.1mol/L柠檬酸钠(调pH值6.55±0.05)55ml,DMF20ml,水425ml。
流动相B:流动相A60ml,4%DMF/乙腈140ml。
梯度洗脱,约30分钟走完。
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张先生[使用道具]
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Waters的ACCQ.TAG法样品怎么前处理?
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mamamiya[使用道具]
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用过Agilent柱前衍生的,分离效果很好,各个氨基酸的分离度很好,也比较容易操作
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小糖块[使用道具]
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Waters的ACCQ.TAG法样品怎么前处理?

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waters的ACC.TAG的样品需要用衍生试剂进行衍生化处理,然后再进样分析。Waters公司有专门的ACC.TAG试剂包及操作手册。可以和他们联系。不过ACC.TAG试剂包一套很贵的。
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star#room[使用道具]
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用过Agilent柱前衍生的,分离效果很好,各个氨基酸的分离度很好,也比较容易操作

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我们也是用Agilent柱前衍生的,但是有几个氨基酸分离不好(组氨酸、甘氨酸和苏氨酸,还有胱氨酸、缬氨酸和蛋氨酸),不知道是什么原因呢?请指教!谢谢
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u234[使用道具]
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我们的是两种方法一种是跟你们一样三氟乙酸-乙腈体系
另一种是高氯酸加磷酸-乙腈体系(流动相A:1水合高氯酸钠14g加1000ml水溶加1ml磷酸,流动相B:乙腈),但色谱柱全是苯基柱;
个人愚见:三氟乙酸作为离子对试剂,调节PH,是蛋白处于分子状态,高氯酸-磷酸体系也是这个原理吧;但是对于“偏碱”蛋白(等电点高的蛋白~~可以这样说吧,,不严谨~~~),应该用碱性离子对试剂吧例如三乙胺,但是三乙胺-跟乙腈搭配做流动相????回去我给你查查书,

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谢谢了!加三氟乙酸在酸性条件下利用离子对作用增加蛋白的保留,所以我选择了三氟乙酸,且三氟乙酸的吸收波长在200nm一下,对214nm波长的检测干扰较小。我现在只有一个C18柱,没有苯基柱,不知道高氯酸钠加磷酸-乙腈体系能不能用于C18柱呢?非常感谢的解答!
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从你的体系看,分离度应该不是大问题,改善峰形才是关键。可以调整流动相的pH试下。
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vera+[使用道具]
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可以试试丁烷基磺酸钠、辛烷基磺酸钠、SDS离子对试剂
我也是做蛋白HPLC
一起学习
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