液相色谱

根据测量图谱如何计算分离度， 理论板数

另外  10mM磷酸二氢钾（PH3.0）：甲醇(25：75)流动相   如何配制啊？

1、
分离度=2*（两峰高间的距离）/峰宽之和
理论塔板数=16*(保留时间/峰宽)^2=5.54*(保留时间/半峰宽)^2
注：半峰宽为峰高一半处的峰宽


2、流动相的配制：
25%的水相配制方法：
根据Henderson缓冲公式：pH=pKa+lg(Cb/Ca)；Cb是缓冲对中共轭碱的摩尔浓度，Ca是对应的共轭酸浓度。pH3.0磷酸二氢钾是以磷酸/磷酸二氢钾组成的缓冲溶液，这里Cb是磷酸二氢根，Ca是磷酸，磷酸的pKa1=2.02，按要求Ca+Cb=10mMol/L，两式联立就可以求得配制浓度了。
计算结果，每升水中应加入磷酸二氢钾1.23g、0.1mol/L的磷酸溶液9.48ml。

取配好的水相250ml与750ml甲醇混合，摇匀，过滤，即得到流动相。

流动相配置：称取1.36g磷酸二氢钾溶于1000ml水中，磷酸调PH=3.0  此溶液：甲醇=25:75    混匀，抽滤超生，使用

谢谢大侠，小女子还有疑问：混匀后在抽滤的话用有机膜还是用水相膜啊

分离度 (R) 的计算公式为：
R ＝ 2(d2 -d1 ) /(W 1 +W 2 )
  式中， d 2 为相邻两峰中后一峰与原点的距离； d 1 为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W 1 及 W 2 为相邻两峰各自的峰宽。通常分离度应大于 1.5 。

理论塔板数（n）计算公式为：
n=5.54(tR/W1/2)
  式中：tR是组分的保留时间；；W1/2是半峰宽；理论塔板数表达了色谱峰的扩张程度和色谱峰的陡度，但不能说明色谱柱对组分的选择性。

含有有机相一般是用有机膜！所以你的用有机膜过滤！

流动相里有有机相必须用油膜，不能用水膜，因为有机相能把水膜溶解了，缓冲盐就随便了，理论是水膜，但你用油膜，也没人说你什么，就是速度慢很多