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标题:[分享]李晶教授提供：细胞冻存、解冻方法与细胞计数

园丁##[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在细胞的冻存很简单，不像楼主说的那么麻烦，我说一下我现在所用的细胞冻存方法，甚是简单，而且冻存的效果很好！取生长良好细胞消化后，用血清悬浮细胞，然后缓慢加入10%DMSO，混匀，每管细胞数为3*10^6个，每管1ml即可，然后放入细胞冻存盒(很多公司都有卖的)，置于-80度冰箱过夜，第二天就可以转入液氮中，这个方法百试不爽！
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TAT[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

现在细胞的冻存很简单，不像楼主说的那么麻烦，我说一下我现在所用的细胞冻存方法，甚是简单，而且冻存的效果很好！取生长良好细胞消化后，用血清悬浮细胞，然后缓慢加入10%DMSO，混匀，每管细胞数为3*10^6个，每管1ml即可，然后放入细胞冻存盒(很多公司都有卖的)，置于-80度冰箱过夜，第二天就可以转入液氮中，这个方法百试不爽！
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发表于 2011-12-1 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

每次细胞复苏,细胞都不能贴壁.过几天后就都死了.都不知道是什么原因?
请高手指教!
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一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:13 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人观点：每个实验室的冻存方法和冻存液的配方（包括解冻），或多或少有差异，但却是每个实验室的老师多年总结适合自己的方法，当然，老师的方法不一定完全正确。但要尝试一种新方法，就要对比，当证明新方法比老师总结的好的时候，也要和老师交流，而不是盲目的觉得他人的方法就一定比自己的好。适合自己的才是最好的！
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duoduo[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:21 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想请教大家一个问题：复苏的细胞，是一次性将复苏细胞加入预先温热的培养基中好呢，还

是将培养基少量多次分加好呢？
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发表于 2011-12-1 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

其实很多细胞培养的书上都有过类似的介绍!
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一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:22 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

因为有时实验很多，把冻存的细胞放在4℃或-20℃就忘了，损失很大，所以现在采用有盖的泡沫盒子，将冻存管直接放在里面，注意不要倒翻，放到-70℃冰箱，第二天在放到液氮里，效果很不错，推荐给大家。
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发表于 2011-12-1 15:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

运气真是好啊，我一般在4℃30分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜) 这样的情况每次复苏都要看细胞的生命力，强的才能活，弱的直接就挂了。
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duoduo[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
刚开始养细胞，复苏细胞都是直接就培养基就算了，是不是先离心会比较好？
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2011-12-1 15:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞计数一定得染色吗
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