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标题:[分享]Caco-2细胞培养的一点重要经验

彼岸花opp[使用道具]
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我有几个问题想请教一下:
1.测电阻时,用Hank’s洗完的电阻值是不是比培养基养的时候测的电阻小?为什么?
2.细胞养到21d以后,要测电阻值时是用不含钙镁的Hank's吗?含有钙镁会对细胞有什么影响?
3.这个细胞接种到transwell里面以后,如果每隔一天测下电阻的话,是不是特别容易污染?我如果用聚碳酸酯膜,看不到细胞形态,那怎么判断我的细胞污染没污染呢?污染后细胞电阻长不上去去吗?
4.做完实验后,版主还会测下电阻吗?会不会降很多呢?
期待回复,谢谢!呵呵~~

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我做过一段时间,尝试回复一下,供参考

1 用Hanks洗完后因溶液的介质不一样,电阻会有变化,正常。

2 我用的是含钙镁离子的平衡液,是否有影响就没详细追查咯,反正结果还是比较理想。

3 隔天测电阻对细胞的确有一定影响,污染倒不一定的,只要操作得当。用聚炭酯膜看不到细胞,但拿细胞板对光看可以看见细胞层的,不完整或剥落很容易就看到,另外可以根据培养的颜色变化来判断。

4 我做完实验后,都会测电阻,操作得好的话应该变化在50欧姆左右。
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flower-201[使用道具]
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我刚开始准备养Caco-2细胞做转运实验,请教一下DMEM培养基怎么选择呢?葡萄糖含量对细胞生长影响如何?另外看到前边有战友说transwell不需要铺胶,那这样的话transwell可以重复使用吗?

新手上路,请多多指教
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楼主有没有遇过细胞不贴壁啊,昨天下午解冻了一管细胞,当时看的时候贴壁的挺多的,今天过来换液细胞很少贴壁,都一个个的飘着那。高手,有没有遇过这种情况啊,给个建议啊
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我用常规方法复苏caco-2细胞,加入高糖的DMEM培养液(含1%非必需氨基酸、20%胎牛血清、双抗),用一次性培养瓶培养,初始镜下见细胞密集,
24h后细胞仍不贴壁,已排除污染,为什么会出现这种情况?和没用进口血清有关吗?现在该如何处理?请高手指教,万分感激!
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fsdd817[使用道具]
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我前两天刚从中科院细胞库买的这株细胞,买回来的时候就在200倍镜下看了一下状态,没有看高倍镜,当时觉得长得太满了就直接进行了传代,今天是第三天,根据中科院老师的说法,今天再换液,但是当我换液的时候,我突然想起来在高倍镜下看了一下,结果被吓了一跳,400倍下细胞周围好多黑黒的东西,还有黑色的细胞样圆状物体,但是没有发现运动迹象,300倍下又不是黑色的了有点发亮,我不知道是染菌还是楼上同学们说的细胞的分泌物,求高手指点!非常感谢!


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我也养这个细胞,真的痛苦,养了快一年了,总是有问题。买回来的时候挺好的,但是冻存后复苏总是长的特别的慢,要将近一周才能长一起来。在养的时候还会出现有梭形的细胞,开始以为是杂细胞,还打电话问了中科院的老师,他们说不是杂细胞,说这个细胞就是这个特点,有时候会有梭形的,还会有大量空泡。
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我也看到你这样的情况,而且低倍镜下平皿底面也总是有很多不干净的东西,还有会一小团一小团的黑色物质出来,每天换液每天都会有,看着很不爽,但是细胞还在长,应该没有污染,就是长的慢死了。
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lixi559[使用道具]
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四福晋[使用道具]
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我养的时候倒是从没有过梭形细胞。。。其它地方的细胞倒是很像。这个细胞就是这样,看上去脏脏的,一定要用PBS洗,然后用胰酶消化传达,细胞必须消化成一个一个的,才会长得好。
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