小中大这个细胞对生长环境的要求非常之高。除了大家熟知的培养液条件的苛刻外（此不详述，又不懂的可留言问），对生长的空间问题要求比较高。
在每一次传代消化的时候，要消化足够长的时间，要不停地在镜下观察细胞的消化状态。因为这个细胞长的比较厚，所以消化比较困难。需要耐心。而消化的结果应该是保证足够多的细胞都是成单个状态而不是抱团或者成片。对于这一点，常规消化是比较难做到的。所以需要采取点特殊措施，我一般是这样做的：
首先吸干净原培养基，加入PBS洗，至少洗两遍，第二遍可以时间长一点，起到一定浸润作用，然后吸走，加入少量含EDTA的胰酶（以下简称YE）润洗，快速润洗完细胞生长面后吸走，然后加入适量的YE（我个人一般较常用量多加0.5-1ml），进行充分的消化，保持在镜下适时观察。待较多细胞被消化下来悬浮于消化液中，大部分细胞边缘皱缩变清晰后，用吸管吸出消化液入离心管中加入适量培养基，常规离心5分钟左右，离心完毕倾倒上清，加入新鲜培养基吹打均匀，然后置于新的小培养瓶中培养。原培养瓶中加入培养基吹打，细胞吹下来之后，适当多吹打几次细胞悬液以使细胞单个分离均匀。然后分瓶传代，原瓶加入新培养基继续培养。
很关键的一点就是将YE的消化细胞悬液加培养基离心后培养，因为这里面的细胞基本上都是被消化下来的单个单个细胞，Caco-2细胞单个单个的生长会比抱团的生长的好很多。传入新的培养瓶中之后你可以与原瓶进行比较。当然若细胞消化的好的话，这点可以舍弃掉。
提醒;一定要用好的胰酶！这点钱一定得花！
希望对大家有用。
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请问离心转速是多少？我曾试过离心，完了之后肉眼看到白色絮状，细胞黏粘在一起。再请教一下这细胞不怕消化过头吗？如果消化过了头是什么状态？我没养过细胞，一来就养Caco-2。。。郁闷
我从其他实验室拿回来的细胞，一开始状态很好，透明均匀长得飞快。养了2周传代了四五次后越来越差。瓶壁没长满但不均匀，有的地方成片掉落而且越来越脏。我再复苏刚拿回来时冻存的细胞，24小时后都没几个贴壁的。。。很是担心，实验室就我一个人养还没人指导。
