[讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论 - 经验共享

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标题:[讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论

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发表于 2011-12-2 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请大家仔细看一下这个彗星分析的图像特点，头小而尾大，和以前我提供的截图不同，右侧的曲线呈双峰（M型）。这就是典型的凋亡细胞彗星图像。

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回答loli战友曾提出的问题：
裂解液的成分：NaCl, Na2EDTA, 肌氨酸钠, Tris-HCl, 用前加 TritonX-100 , 二甲基亚砜, PH值8.2-8.4,使用前4 ºC在预冷。
光谱条件：（EB）：激发波长515-560nm，绿光。

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有时间我做一个详细的CASP软件使用图解，今天恐怕不行了。

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

奇怪啊，刚才是不能输出结果，现在是突然可以了但是呢，每次输出的结果都是第一次的结果，很是奇怪啊

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Q1好像结果的那一栏总是显示第一个文件的名字，显示result 1，后来的文件的名字就没有了
Q2我的照片很大，不满足分析的条件，每个文件的大小是14M，我想把它改小一点，怎么改啊，谢谢大家
Q3就是我的一张片子的不同地方的结果差异很大，有的地方很小的拖尾，有的就要大一点，我应该怎么做啊
Q4我用EB的背景有点高，就像上一个战友的那种，应该注意什么地方啊
Q5同一批的样品只是浓度不一样，有的片子的结果很好，有的就很差劲，想不出来是什么原因
希望能和大家讨论一下啊，谢谢

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

回复 #95 乌贼老弟的帖子

您好，您的个别问题不够明确，请明示，我暂按我的理解回答：
Q1：注意我上面有一个帖子的截图，在您把“小齿轮”点击后，出现红色的斜杠，同时，它左侧第三个按钮由灰色变亮，每分析一个彗星后，都要点击它，才能保存结果，然后分析第二个彗星图像，同样也点击那个按钮，最后把所有的图像都分析完成后，按我以前所说，输出结果，OK！（我会做一个详细的CASP使用图解）。
Q2：照片大的问题很简单，ACDsee这个软件就可以，我在4月25日的帖子里提到了用这个软件转换文件格式和大小，很简单，但是有一点我不太明白，您的图像为什那么大？数码相机拍出来的不会那么大吧?什么格式的？如果是BMP格式，那就比较大，赶快把它转换呈TIF格式，用于CASP分析。
Q3：这一点很正常，有战友在该版的“图片仓库”子版的单细胞凝胶电泳图像后面的跟帖中提到这个问题，可以去看看，说明不同细胞受损程度不同，这种现象在药物毒性试验中可能小一些，在射线损伤中尤其突出，我深有体会。
Q4：我在本专题前面的帖子早就提到过EB的浓度和量的掌握，EB过多肯定影响图片质量，像上面战友提供的一张图，背景很乱，没有分析价值，一点点染液就足以让DNA显色，另外，千万注意电泳后用水冲洗，最好立即染色观察，胶板不要干，否则前功尽弃，质量很差。
Q5：“同一批的样品浓度”，指的是什么浓度？细胞浓度？OR药物浓度？

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

Q5：我理解可能是药物浓度不同，出现您说的结果是否试验过程中有失误？试验用的器械尽量干净，不要混入其它杂质，另外，跟兔子学习学习，"狡兔三窟“，我就是这么做的，每一个样品最少铺两张胶板，同时裂解，如果其中一张失误了，还有另一张候补，呵呵，我觉得这方法不错！

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2011-12-2 11:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

对了，老师能不能给解释一下，图像分析结果的横纵坐标代表什么意思吗

一叶[使用道具]
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