细胞世界

您的问题很好，说明您善于思考，呵呵。细胞肯定要用低熔点胶混合，铺胶前低熔点胶PBS溶解、煮沸，要温于37度水浴箱，再和细胞混合，不会破坏细胞，而正常熔点凝胶就做不到了，正常熔点胶要煮沸后立即铺胶，否则温度降低，就凝固了。
我也赞成您的想法，因为我就是用的双层铺胶法，根本不用铺第三层，有文献报道只铺一层胶，呵呵，那就更简单了。
我没做过H2O2，不敢妄加评论，但是，试验结果要通过科学的统计学分析后得出结论的，我不知道您说的“区别不大”是否经过了统计学分析呢？如果预实验时您发现了前几个剂量的效应无差别的话，可以在正式试验中保留其中的一个剂量，当然最主要的还要看它和阴性对照组之间有无差别。我觉得初次用这个方法做毒性试验的话，一定要找到和阴性对照组之间有差别的最小剂量，然后剂量逐步提高，如知道半数致死剂量就更好了，有了两个坐标，在这两个剂量之间选择剂量，当然，在大于半数致死剂量还要选择一定剂量，随着剂量的增加，必然会出现从某一个剂量以后，大于此剂量的若干组之间都没有了差别，那就以此剂量造成的损伤作为100％（如尾长、尾矩、OLIVE尾矩等等好多指标可测），首、尾都有了，中间就好办了！可以根据这个剂量范围，继续做凋亡细胞率的观察，看看这个指标怎么样。
个人看法，不一定合理，仅供参考，见笑了。

谈一些我的经验，希望有所帮助。

我们用有机玻璃板自制了一套架子，按照电泳槽的大小制作一个托架，可直接放进电泳槽(托架上打孔使电泳液自然流动,否则胶会被冲跑)。托架可以放置8个载玻片托架。载玻片托架与载玻片同宽，略长，按载玻片大小粘上4个有机玻璃小块，载玻片可以嵌入托架。

关于铺胶，我们只铺一层，说是铺胶不如说是“滴”胶。载玻片倾斜，用较大口的玻璃滴管滴在靠上部分，胶会自然流动形成。非常薄的胶使得彗星图象更清晰。每个玻片可以找到20-60个有效细胞。

图像系统直接用摄像头接在显微镜上。摄像头的线性要好。我使用中性滤片校准灰度值。穷人只能因陋就简。几万的摄像头可买不起。因为一个图像一个细胞，分析可以批量处理。

很感激两位高手的指点，真的是帮助很大啊，呵呵。
我现在胶的问题基本上解决了，看来一个试验应该注意的细小的地方真的是很多，我还得踏下心来一点一点的解决问题，说实话问了这么多的问题真怕大家烦了，昨天还有点担心大家不会再给我解答问题了呢，呵呵。看来担心是多余的了，一叶 老师辛苦你了，感谢万分！同样的谢意也送给园丁##！

PS：希望还能继续讨论！

我其实一点实验都还没做，我还有8个月的时间，前一阵子一直在变方向，老是确定不下来做什么。我很惨的，导师是搞行政的，没有人能帮我，我全都是自己设计。看了很多文献，但是光看不做什么效果也不会有。
我不清楚你研究的方向是什么，如果是毒理或相近的话请帮帮我，我出些钱过来做实验好吗？
我一个人实在无法撑下去了。而且我们实验室那边都不是做毒理的，根本没实验条件。