细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论

乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
41
 

回复 #40 一叶 的帖子

收到,不过结果和我以前安装得一个样子,就是点击它,安装在c盘,然后,桌面上形成一个不能识别的图标,点击它会提示:快捷方式casp.link指向的驱动器或网络连接不可用,请确认磁盘插入正确或网络资源是否存在,老师您知道是什么问题吗?机器是XP系统,一直安装不上就是因为这个原因。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
42
 

回复 #41 乌贼老弟 的帖子

奇怪,我还从来没有遇到这种事!可能是软件的问题。(我在单位和家里的电脑上都有安装,均未出现任何问题)
你在D盘建一个文件夹,如命名为CASP,把软件安装到这个新建的文件夹中,如果桌面上出现快捷方式,干脆把它删除!然后到D盘,打开刚建立 的CASP文件夹,找到其中的CASP.EXE,左键双击它,看能不能出现CASP的工作界面,如果工作正常,那就再右键选中CASP.EXE,选择发送到桌面快捷方式,桌面会出现一个新的快捷方式,这个快捷方式可能是一个不可识别的图标,但是双击它时可以正常出现CASP的工作界面,那就OK 了。另外,请注意,成功安装后,在新建的CASP文件夹中,会有一个CASP.ICO文件,那是一个图标文件,你可以把桌面上的不可识别图标换成它,这个图标就好看多了。
试试看,应该没有问题!我刚才在我的机器上又试验了一次,绝对不会有问题,安装后,好好阅读我发的CASP使用说明,几分钟你就会用了!(其实安装成功后,它自带使用说明的)。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
43
 

记住,CASP软件只读.tif格式的图像,如果你的相机拍的照片没有这个格式,可以存如计算机后,用ACDSEE(现在是7.0版本)转换一下,很方便的。还有,用CASP分析时一定要让彗星的尾巴方向向右!其实这在使用说明中都有的。你在做试验时,电泳仪的阳极端在你的左侧,DNA片断会向阳极迁移,彗星尾巴当然向左,但在显微镜下尾巴就会向右,原因不用我解释吧?那拍下来就是尾巴向右了。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
44
 
呵呵,今天中午我突然想到你可能遇到你提到的问题,果然出来了。背景的选择问题,如果图片质量好的话,背景大小不同,对结果影响不是很大,如果图片背景乱七八糟,那背景框的选择肯定对结果产生很大影响。我的建议:背景框不要太大,参考我贴的那个图。注意,背景框可以在细胞的上面或下面,如果背景框在上面时,分析后的图像(分析后出现一个头、尾分明的图像,是基本重合在细胞上的)质量很差,很不规则,那再把背景框调到下面试试,如果还是不好,那只能说你的结果质量不好了。背景框的选择关键在于分析同一批细胞,背景框要相同,才能保持资料的可比性。
结果的保存,记得好像使用说明里提到了,如果没有提到,那就是我原创的!!!呵呵,先卖个关子。FILE菜单下有一个EXPORT RESULTS(输出结果)的按钮,点击以后,默认是.TXT文本文件,好了,给你的输出文件起个名字,选择保存位置,点击确定就OK了,回到你保存的输出结果文件,发现它是一个不可识别的文件,那就直接把它的扩展名改成.TXT,打开它,看看你的结果,包括13个指标,很好,这个.TXT的结果文件可以被SPSS统计软件直接识别,不是很方便吗??(如果你愿意把数据一个一个地输入统计软件,我也没意见,呵呵)。这里还有一个小窍门,在用SPSS读取之前,最好把你的结果文件调整一下,这也是我发现的。把所有的指标都排列到第一行,下面的结果要和指标一一对应,每个数据之间留空格(默认的),行与行之间不要用回车,就是不要有空行,其实调整起来很简单,主要是调节.TXT文本文件阅读框的宽度。调好后,SPSS软件直接识别,很方便,为你节省很大工作量,不信就试试。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
45
 

关于你的下一步工作,如果还想做SCGE,体内试验当然是最好了。那就结合FISH 或流式,如果你的药物不知道它的靶染色体,那就慢慢摸索,FISH的成本高,看你老板的经济能力了,如果你第一个发现了你研究药物的靶染色体,呵呵,不是很惬意??和流式结合的试验我也没做过,我们的流式刚刚到位,正在调试。流式可以把具有不同表面特异性分子的细胞提出来,然后做SCGE,如果有新的发现,你的论文不是更好吗?当然,探索就要有风险的。如果不做SCGE,药物试验(尤其是生物效应方面)还可以做染色体畸变、SCE(姐妹染色单体互换)、微核,其中以SCE对药物的特异性最好。这方面我没经验,我们这一个老教授很有经验。
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
46
 
对了,您说照相的时候的放大倍数对结果有没有影响啊,是不是选择的倍数不一样,图片的质量也会不同啊,应该是清晰度不同吧。我一般选择20倍的,因为觉得照下来的彗星多
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
47
 

回复 #46 乌贼老弟 的帖子

我觉得用高倍镜比较好,40倍物镜,如果您用20倍物镜拍的图像用CASP分析时效果好的话,也不妨用20倍,还是那句话,每一批试验所有条件相同就可以,否则没有可比性。你说呢?
顶部
fqswdzd[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77226
精华 1
积分 295
帖子 285
信誉分 102
可用分 2181
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
48
 
一叶 老师:您好
您说您用的是两层胶,我想知道您这两层都用的是多大浓度的胶?多大量?怎么铺的?
顶部
fqswdzd[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 77226
精华 1
积分 295
帖子 285
信誉分 102
可用分 2181
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-15
状态 离线
49
 
都怕EB有毒,而吖啶橙效果又不好,所以想换一种,但是SYBR Green Ⅰ是结合双链的内嵌染色剂,而碱性电泳是把DNA双螺旋解开成单链的,所以甚觉不妥,望不吝赐教!

前面 一叶 老师已经做了解释,在此再提出来向各位高手请教,先谢谢了!
顶部
乌贼老弟[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74586
精华 0
积分 336
帖子 411
信誉分 100
可用分 2791
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
50
 

回复 #49 fqswdzd 的帖子

SYBR Green Ⅰ用于检测双链,所以你还是用EB,DAPI的敏感性比EB要好一点,你也可以用,不过还是强致癌物。
顶部