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标题:[讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论

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回复 #48 fqswdzd 的帖子

您好,前面我已经介绍过,我用双层铺胶法,自制微电泳槽,第一层:0.75%正常熔点胶,100μl,第二层:0.75%低熔点胶,75μl+25μl淋巴细胞悬液,用枪直接把凝胶吹到自制的微电泳槽中,铺平即可。第二层以相同的方法铺到第一层上面,不必担心脱胶的问题。
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回复 #50 乌贼老弟 的帖子

您好,前面我已经介绍过,我用双层铺胶法,自制微电泳槽,第一层:0.75%正常熔点胶,100μl,第二层:0.75%低熔点胶,75μl+25μl淋巴细胞悬液,用枪直接把凝胶吹到自制的微电泳槽中,铺平即可。第二层以相同的方法铺到第一层上面,不必担心脱胶的问题。
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回复 #35 utt0989 的帖子

战友您好,在凝胶中即使有细胞的话,不通过任何染色措施,不易看到细胞,在凝胶中不同于细胞悬液,有时看悬液中有无细胞,可以直接滴片,自然光镜检,可以看到细胞,儿在凝胶包裹中就不容易看见了。首先您要确定悬液中有无细胞,如果您用的细胞系的话,应该有细胞,如果没把握,您可以在裂解完成后,先不电泳,直接染色看一下,如果有细胞,在荧光下是很漂亮的一个个细胞,圆形,周围有晕环,(这我曾试过,所以我敢说),如果看不到细胞,那就是凝胶中根本没有细胞,我建议您换EB试试,注意防护就可以了。其实做试验多是在对药品毒性了解的情况下进行的,而现实生活中有多少我们不能察觉而根本没有防护的损害因素呢?所以我觉得不要因噎废食,做好防护就可以了。
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还有一个可能原因就是您的激发光波长不合适,
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大家有没有朱志良发现苯代谢物的靶染色体的那边文章吗?我自己怎么都找不到啊,希望大家帮个忙,谢谢!
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我查了万方和CHKD都没找到,只是在文献上看到过他发现靶染色体的叙述,也没找到原文,不知道怎么回事。国外文献?可是一般国内也该有的。
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回复 #56 一叶 的帖子

我想知道假如我做一个基因的探针,因为这个基因可能会很长,我可能只做含有几个外显子的探针,如果FISH结果阳性那就好说了,但是如果是阴性,您说是不是想叫大家大家相信就要做更多的工作啊,因为大家怀疑是你试验过程或者设计有问题啊
因为我现在想证明一下这个药物可能的致癌性,能不能选个癌基因做一下FISH啊,如果有损伤,能不能说明一些问题啊
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一叶[使用道具]
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如果你研究的基因在染毒后出现断裂,不管断裂点在这个基因的哪个部位,你的探针标记肯定会在电泳后跑出来,如果通过多次重复试验,还是阴性的话,说明药物的DNA靶点不在这个基因上。
我有一点不明白您的意思,(药物的致癌性和DNA 断裂的关系)。药物导致DNA断裂,不完全等同于它的致癌性吧?两者是有关系,但不能说药物可以使DNA断裂,就有多强的致癌性吧?(呵呵,也许我没有看明白您的意思)。我觉得说“基因组不稳定性”更好。您说呢?
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回复 #58 一叶 的帖子

对,您的意思很对,我也是这么想的认为它可能的致癌性,呵呵,没有表达清楚。
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一叶 老师:
你好,最近打算做一下彗星实验,以前没有做过,身边也没有做过的人,请教一下几个问题:
1.实验中所使用的载玻片是不是一定要那种frosted slide,用普通显微镜使用的那种透明的载玻片可不可以?
2.实验中使用的盖玻片是不是就用那种小个的正方形的普通盖玻片就可以?
3.在染色后观察时是不是不用在用清水冲洗了,从染色液里拿出直接盖盖玻片观察?
4.电泳时的电压文献里说法不一,这个电压的选择有什么标准?需要电泳多长时间
5.我不是学生物的,对显微镜不太熟,就用过那种最简单的,彗星实验里需要用什么样的显微镜,好像如果用visual scoring,就是肉眼定等级那种就用普通的显微镜照相就行了是吧,是不是得用专门的能往上装相机的显微镜啊?如果要用软件分析的话,好像还得有滤光片之类的,是不是还得有激发波长之类的需要调的参数,谁给介绍一下,另外这种分析软件是不是都是显微镜自带的分析软件,还是把图像弄下来有第三方的分析软件?
6.如果用EB染色的话,需要泡在EB里吗?还是往上滴染色液就行了?观察时用什么光谱条件?
希望能够得到您的帮助,非常感谢!
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