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标题:[讨论贴]单细胞凝胶电泳技术及应用讨论

loli[使用道具]
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又想到几个问题:
1.看前面的帖子,您用的中性条件,裂解液的成分都是什么,ph在多少?
2.您为什么要专门做一个小电泳槽?把玻片直接放在水品电泳槽里不可以吗?如果没人碰它,应该不会随便移动吧?可不可以把自制的小电泳槽照张照片放在上面,让我们看一下是什么样的
谢谢!
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abc816[使用道具]
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我想问 一叶 老师:我也是用CASP分析彗星的,但是相机拍出来的是JPEG各式的,想要把它转成TIF格式,我通常是在photoshop上转的,但是必须一张一张的转,这样很费时的。可不可以同时把所有的照片转呀?
还有,CASP上的ADJUST可以调尾部或头部的大小,但是程序的默认值是最佳的,说明上好像说了与灵敏度有关,最终我还不懂是怎么回事,虽然这个与分析没有什么关系,但是我觉得知道他的原理更好一些。
读了您上面的帖子,我重新又把软件用了一遍,感觉进步了很多,谢谢你哦。
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abc816[使用道具]
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载波片一定不能用普通的,否则胶很容易掉下来.
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abc816[使用道具]
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2。盖玻片用普通的就可以了,但是可以自做的,普通的盖玻片其实有点小了,如果胶很多的话,第二层胶非常厚,这样不利于观察细胞,而且不利于电泳。
3。染色后要用双蒸水冲洗,据我的经验,冲要冲的非常干净,否则背景太亮了,拍照后不容易分析。但是又不能使劲的冲,否则胶很容易掉下来。
4。电泳的时间一般是20分钟,电压各个细胞是不同的,你可以查查有关资料,自己做做预试验。一般情况下,对照组的细胞的tail DNA%应为10%左右,不超过20%,如果尾巴太短了,也不好。
5。分析要用荧光显微镜的,具体的染液,有不同的激发波长。casp软件在前面的帖子中就有。很好用的,在推荐一次哦。最好用显微镜自带的相机,如果你的技术好的话,可以在目镜照相,洗出来扫描后可以分析的。
6.把EB滴加在胶上就可以了。观察时要在暗室里。
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abc816[使用道具]
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1。裂解液的配方也是不同的,这个可以在网上找找。
2。玻片可以直接放在水平电泳槽里,但是一定要放直,和边缘靠齐,否则跑出来的尾巴向上翘。倒电泳液的时候,也要注意,防止水把玻片冲歪了。
祝你试验成功哦!
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乌贼老弟[使用道具]
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请教,彗星的分级是根据尾长分吗?它说的15um是指除以放大倍数后得到的数值吧
它的分级标准是不是有很多个 啊,还有根据损伤率分的,到底哪个准确一些啊,或者通用一些
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loli[使用道具]
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回复 #62 abc816 的帖子

谢谢abc816,再问一下,盖玻片太小的话,可以用那种普通透明的载玻片代替吗?
会不会太厚了影响观察?还有,有那种能直接买来用的小片的毛玻璃吗?
还是得买大片的自己分割?
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abc816[使用道具]
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回复 #67 loli 的帖子

每分析完一个数据要点“保存”按钮,最后你保存用“文件名.txt”,打开这个文件后,你全选,复制,然后复制到word文档上,然后全选,点表格中的将文件转化成表格。然后你就可以看到数据了。
你看不到数据,因为你分析得数据有点少了,不过这个没关系的。
如果你再找不到,告诉我,我给你介绍的详细点。
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abc816[使用道具]
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回复 #66 乌贼老弟 的帖子

现在根本不分级了,那个有点过时了,而且主观性很大。
用casp软件直接就可以知道13个指标,你只要选一个单项指标和一个复合指标就可以了,一般是选tail DNA%和tail moment.
ihuan,不能用普通的载波片,太厚了,而且很重,作出来的胶不好,不平,这样不利于电泳。你观察细胞的时候当然要把盖波片揭掉了。
毛波片可以在一些公司订购的,千万不要用普通的载波片。也可以自己磨,不过比较费时,而且做成的几率也非常小。
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loli[使用道具]
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用哪种染色剂比较好?
丫叮橙和EB哪种效果好些?
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