实时定量pcr操作请教

最近打算做siRNA试剂对细胞某种蛋白表达量的影响,计划在mRNA和蛋白两个水平上进行检测。在此想问一下各位大神,在用实时定量pcr这种方式检测mRNA表达量时有什么关键的控制步骤;在甲醇和乙醇等有机溶剂的选择上,国产分析纯试剂(不购买色谱纯)对实验结果是否有影响?由于实验室经费有限,是否可推荐一下效果较好,价钱较低的逆转录试剂盒?