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标题:肿瘤抑制子p53蛋白与人鼻咽癌的关系
medicilon
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1
发表于 2018-7-5 14:54
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肿瘤抑制子p53蛋白与人鼻咽癌的关系
p53
蛋白是是一种抑癌基因,基于
p53
蛋白开发抗癌药物,也一直是肿瘤研究的关注点。例如
p53
蛋白在人鼻咽癌中的表达及其临床意义的研究,采用
western
印迹分析
方法结合免疫沉淀技术,检测鼻咽活检组织
p53
蛋白表达。最终得出的结论是鼻咽癌
p53
蛋白的异常表达多见于恶性程度较高,分期较晚,
TgA/VCA
滴度高和
TgA/EA
阳性的病例,提示
p53
基因在鼻咽癌中可能发挥一定的作用。
p53
蛋白是一种转录因子,在细胞处于应激状态时可被诱导表达,从而促进细胞进入细胞周期的停滞阶段,继而凋亡或者衰老,调控细胞代谢通路,调控与胚胎植入过程相关的细胞因子表达等。野生型
P53
基因具有抑癌作用,突变型
P53
基因则为致癌基因,
P53
基因结构改变及表达异常是人类肿瘤中常见的现象之一。
一些数据显示,
p53
蛋白简直就是生物学领域里的
“
大腕
”
,在
PubMed
中,有关
p53
蛋白的文章就超过了
5
万篇,而且这个数字目前仍然以每周数篇的速度稳定增长。毫无疑问,由
TP53
基因编码的
p53
蛋白是生物学领域中研究热度最高的蛋白。上海美迪西的生物部在体外生物学领域有丰富广泛的经验,通过酶水平测定、细胞水平测定、细胞生物学、生物化学、体外同位素测定、稳定细胞株建立、基因敲除、
RNAi
和
MicroRNA
技术等,提供一套完整的生物学服务。
1
、
western
印迹分析
方法分析
p53
蛋白在人鼻咽癌中的表达步骤
(
1
)组织蛋白提取
标本来源于疑为鼻咽癌的初诊患者鼻咽纤维镜的检测标本,活体组织标本经病理检查确诊其中
104
例为鼻咽癌,
8
例为鼻咽粘膜慢性炎症。
活体组织取出后,在冰浴下用玻璃研磨器磨碎标本,然后加入细胞裂解液裂解细胞,超声波处理,离心,取上清,测总蛋白含量。
(
2
)免疫沉淀
用小鼠抗人
p53
单克隆抗体,根据抗体说明进行标本处理。
p53
抗体
15μL
与细胞裂解物
1mL
进行免疫沉淀。
P53
抗体是一种与
Protein A Agarose
结合的小鼠抗
p53
单克隆抗体,可把裂解物中的
p53
抗原沉淀,形成抗原抗体复合物。
P53
靶蛋白沉淀后弃上清液,沉淀物经洗涤后加入强阴离子去污剂
SDS
加样缓冲液,使靶蛋白与抗体解离,然后用
western
印迹分析方法检出特异的
p53
蛋白。
(
3
)
western
印迹分析
已溶解与加样缓冲液的沉淀物进行
SDS-PAGE
(
150g/L
)电泳,电转移至硝酸纤维膜上,用
1:30
稀释
p53
抗体(小鼠抗人单克隆抗体),进行
western blot,
然后用
1:300
稀释的二抗(碱性磷酸酶偶联的抗小鼠
IgG
)处理,用
DBA
显色试剂盒检测、摄影。
检查结果发现,
104
例鼻咽癌活体组织中,
12
例出现
p53
蛋白表达异常条带,突变检出率为
11.5%
,
8
例鼻咽慢性炎症活检组织中
p53
蛋白表达未见异常。
2
、为什么
p53
是一个重要的肿瘤抑制子
在癌症发展的过程中有两种重要的基因类型:癌基因和肿瘤抑制基因。当癌基因获得功能,比如通过突变时,其就会促进癌症发生,而关闭其功能的特殊药物常常能够用于多种类型癌症的治疗。从另一方面来讲,肿瘤抑制基因能够有效抵御肿瘤,但当其失去功能时,癌症就会继续发展。
p53
蛋白是一种最重要的肿瘤抑制子,一方面
p53
在
DNA
出现损伤后能够引发细胞周期停滞或者消灭细胞,表明它可以通过预防致癌基因突变的累积来防止癌症发生。从这个角度来说,
p53
缺失会导致存活下来的子细胞中基因突变数目增多,从而间接地促进癌症的发生。另一方面,
p53
在致癌基因异常表达时能够阻止细胞增殖,表明它可能在限制致癌基因突变的恶果方面也有重要作用。在这种情况下,
p53
缺失会允许表达致癌基因的细胞继续无限制增殖,从而直接导致癌症发生。不管从哪个角度来说,
p53
都承担着基因组守护者的角色,它会限制基因突变带来的有害后果。
研究表明编码
p53
的蛋白质会在
40%
的癌症类型中发生突变,而剩下的癌症类型则会频繁寻找其它方式来促进
p53
功能失活;来自科罗拉多大学癌症研究中心的科学家
Matthew Galbraith
博士表示,
p53
基因的失活或关闭
p53
蛋白的功能都是肿瘤发生的关键,人们通常会采用药物不断关闭
p53
的表达,但到目前为止效果并不明显。
因此,利用
p53
治疗癌症一直是挑战。已知
p53
基因有多个突变,有超过
1
,
000
个其他基因受
p53
状态的影响,这增大了寻找抑制肿瘤途径的难度。
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