一种肺腺癌诊断的分子标记物之TTF-1基因

甲状腺转录因子-1TTF-1)最早是当做甲状腺特异基因转录的激活因子而被识别的,后来又有研究发现TTF-1编码的同源蛋白不仅表达在甲状腺组织,而且在肺及发育中的大脑的某些部分也见表达。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一,是机体正常生长发育的生理过程,也是活细胞普遍存在的一种运动形式,一些生物公司提供细胞迁移实验服务。有研究者发现TTF-1在肺腺癌中能够很好地表达,可以作为肺腺癌鉴别诊断的一个较特异和敏感的指标。还有研究者应用细胞迁移试验、细胞增殖实验和细胞划痕实验等了解过表达TTF-1基因对肺腺癌细胞增殖能力、迁移和侵袭能力的影响。

肺腺癌是肺癌常见的一种组织类型,其恶性较高,多起源于黏膜上皮,这种癌症早期一般没有明显的临床表现,在平常的生活中不容易察觉,偶尔通过胸部X线检查发现,而确诊时多已属于晚期。TTF-1是今年来发现的一个新的肿瘤分子标记物,是肺腺癌高敏感性及特异性的分子标记物,目前已经证实其在肺癌的诊断和鉴别诊断方面具有非常明显的应用价值。其可以作为肺非小细胞癌的独立预后因素,TTF-1阳性表达与肺非小细胞癌患者预后呈负相关。癌症的形成与肿瘤细胞迁移能力密不可分,常见的细胞迁移实验服务有细胞划痕实验和Transwell实验等

因此有研究者体外应用慢病毒载体转染构建TTF-1基因过表达的A549细胞系,然后实验室培养测试肺腺癌A549细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力,以明确TTF-1基因对肺腺癌细胞增殖能力、迁移和侵袭能力的影响。细胞迁移涉及癌症转移、胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化等过程,美迪西提供细胞迁移实验服务

研究者分析了TTF-1基因序列,设计单链Oligo序列,应用PCR法将TTF-1cDNAOligo序列进行拼接,然后连入pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro,转化至感受态细胞DH-5α,测序鉴定;将携带TTF-1基因的慢病毒过表达重组载体转染至293T细胞,包装产生慢病毒,测定病毒滴度并应用最佳病毒滴度去感染人肺腺癌A549细胞株,构建过表达的TTF-1基因的肺腺癌细胞系,体外继续培养TTF-1基因过表达的A549细胞系,应用细胞增殖实验、细胞划痕实验及细胞迁移实验了解过表达TTF-1基因对肺腺癌细胞增殖能力、迁移和侵袭能力的影响。

测序结果显示,TTF-1基因过表达慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-CopGFP-T2A-puro构建成功,基因序列测序结果正确;经慢病毒包装所得病毒上清液经计算病毒滴度为6×10~7TU/ml;稳定转染的细胞系在荧光显微镜下可观察到GFP表达;QPCR结果显示,TTF-1-A549实验组中TTF-1基因表达量比对照组明显提高,过表达TTF-1的肺腺癌A549细胞系构建成功。进一步应用细胞增殖实验、细胞划痕实验和细胞迁徙实验验证实验组和对照组细胞,最终结果提示过表达TTF-1基因的肺腺癌A549细胞增殖能力、迁移和侵袭能力明显减弱。因此过表达的TTF-1基因可以明显降低肺腺癌A549细胞的增殖能力、迁移和侵袭能力。

适量的TTF-1表达在维持肺等重要器官的发育上起到调节作用,过量的TTF-1的扩增及表达则参与肺癌的发生、发展,与肺癌的诊断、治疗及预后存在一定的关系。研究发现75%的肺非小细胞癌(NSCLCs)阳性表达,腺癌(ACs)明显高于鳞癌(SCC)90%以上的原发性小细胞肺癌(SCLC)表达阳性,TTF-1在非小细胞肺癌(NSCLCs)阳性表达强度与病人的预后成呈负相关,可作为一项独立的预后指标,肺的典型性类癌(TCS)均为阴性,表明小细胞肺癌和非小细胞肺癌可能有一个不同于TCS的共同起源的理论。

肺腺癌及时准确的诊断和鉴别是争取治疗时间,提高患者生存率的关键。除正常组织外,TTF-1在肺腺癌中具有高表达,是常用的肺腺癌诊断的标记物之一,同时也为肺腺癌的靶向治疗提供依据。