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western-blot实验常见问题及解决方案

常见问题                                                                                         解决对策
      

两块玻璃板之间灌胶，胶总是不平                               玻璃没有洗干净，应该洗得很干净
      
                                                                                 过硫酸铵和TEMED加量相对较多

                                                                                              加完试剂后应摇匀

        
总是漏胶                                                                     避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损

                                                                                将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面

                                                                                                   
膜上有明显气泡                                                                    操作时将气泡完全排除

                                                                                            靠膜一侧的滤纸应铺平



特异性低                                                                                           优化一抗

                                                                                             提高一抗和二抗的稀释度

                                                                                        降低SDS-PAGE中蛋白的上样量



背景高                                                                                            优化封闭液

                                                                                          优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数

                                                                                                       减少曝光时间

         

信号低                                                                                             优化一抗

                                                                                                         浓缩样品

                                                                                      选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。