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标题:蛋白质组学技术在结肠癌化疗药物多药耐药机制上的研究

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发表于 2019-1-16 11:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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蛋白质组学技术在结肠癌化疗药物多药耐药机制上的研究

多种耐药相关蛋白的差异和相互作用带来的肿瘤多药耐药性是造成化疗失败的重要原因之一，一些生物公司提供的蛋白质组学技术服务为肿瘤研究及抗肿瘤新药研发提供了良好的技术平台。蛋白质组学是从整体水平上研究细胞内蛋白质的组成、活动规律及蛋白质与蛋白质的相互作用，是功能基因组学时代一门新的学科。利用蛋白质组学技术从蛋白质分子水平探讨肿瘤的多药耐药机制，可为新型耐药逆转剂的开发奠定基础。
结肠癌属于一种恶性肿瘤疾病，从喜树中分离得到的喜树碱天然衍生物-羟基喜树碱和从中药姜黄根茎中提取的一种酚类色素-姜黄素都具有诱导结肠癌细胞凋亡的作用，但是都对结肠癌细胞都具有多药耐药性。对于肿瘤药物研发来说，蛋白质组学技术服务可以提供从整体水平上研究蛋白质间的网络调控，对结直肠癌、食管癌、胃癌等消化系统肿瘤的早期诊断，寻找标志物，治疗以及药物开发的新靶点等方面的研究具有重要意义。美迪西生物医药蛋白结晶服务主要包括蛋白质晶体服务、蛋白质组学技术服务、蛋白结晶服务等，蛋白质及其复合物组装体完整的三维结构的测定是研究生命活动中分子结构与功能关系揭示生命现象的物理化学本质的科学基础。
1、蛋白质组学技术在结肠癌羟基喜树碱多药耐药机制上的研究
羟基喜树碱是具有比喜树碱更强的抗癌活性，毒副作用较小。羟基喜树碱对结肠癌Lovo细胞生长具有较强的抑制作用，它可诱导结肠癌细胞凋亡，且其凋亡作用呈浓度、时间依赖性.对结肠癌羟基喜树碱多药耐药细胞(SW1116/HCPT)及其亲代细胞(SW1116)进行蛋白质组学比较研究，探讨肿瘤细胞的多药耐药机制。方法是培养羟基喜树碱多药耐药细胞和亲代细胞，提取蛋白质，以固相pH梯度等电聚焦为第一向，十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳为第二向进行双向电泳；图像分析软件分析电泳图谱，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱或基质辅助激光解吸电离飞行时间/飞行时间串联质谱鉴定蛋白质。
结果发现9个蛋白质点在SW1116/HCPT细胞中表达量发生改变，4个蛋白质点表达量增加，5个蛋白质点表达量减少。质谱鉴定了6个蛋白质点分别为:琥珀酸脱氢酶复合物(亚单位A)、3-磷酸甘油醛脱氢酶、泛素融合降解1相似蛋白、胞核氯离子通道蛋白、β-微管蛋白和ORF蛋白。该研究有助于深入理解结肠癌羟基喜树碱多药耐药机制，并有望在新型耐药逆转剂的开发上发挥作用。
2、蛋白质组学技术在结肠癌多药耐药密切相关的蛋白上的研究
姜黄素是从中药姜黄根茎中提取的一种酚类色素，已被广泛用于食品色素和香料，具有抗炎、抗氧化、抗衰老、消除自由基及抑制肿瘤生长等作用。研究发现，姜黄素可以诱导结肠癌细胞凋亡，抑制结肠癌的侵袭和转移。有研究者利用蛋白质组学方法，对比经姜黄素处理和未经姜黄素处理的人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR之间差异表达的蛋白，分析与姜黄素逆转结肠癌耐药相关的蛋白。
方法取结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR，分为观察组和对照组，观察组加入终浓度为25μmol/L的姜黄素作用于人结肠癌耐药细胞HCT-8/VCR 24 h，对照组加入等体积生理盐水。以固相p H梯度等电聚焦为第一向，垂直平板十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳为第二向(2-DE)，分离两组细胞总蛋白;通过凝胶银染显色，扫描仪GS-800采集凝胶图像，图像分析软件PDQuest8.0分析电泳图谱，寻找有意义的差异蛋白点，运用MALDI-TOF-MS系统对选取的蛋白点筛选出差异蛋白并进行质谱鉴定。
结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的HCT-8/VCR细胞2-DE图谱。鉴定出可能与结肠癌多药耐药密切相关的10种蛋白，其中在对照组高表达的有7种，分别是谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)、重组人FK506结合蛋白4(FKBP4)、X线修复交叉互补基因5(XRCC5)、肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)、热休克蛋白8(HSPA8)、超氧化物歧化酶1(SOD1)、前列腺特异性膜抗原剪接变体(PSMA5);在观察组中高表达的有3种，分别是肽基脯氨酰顺反异构酶(PPIB)、鸟氨酸转氨酶(OAT)、核内不均一核糖核蛋白H1(HNRNPH1)。
因此姜黄素干预HCT-8/VCR后出现10种差异性表达的蛋白，蛋白功能涉及信号传导、肿瘤细胞的分裂、多药耐药以及抗氧化、凋亡和糖酵解等，可能与姜黄素逆转HCT-8/VCR细胞对化疗药物的耐药性有关。
肿瘤多药耐药性是临床上化疗失败的主要原因之一，利用蛋白质组学技术研究结肠癌的肿瘤多药耐药机制，并寻找逆转药物，成为了国内外研发抗肿瘤药物的热点及关注点。

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发表于 2022-1-26 14:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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姜黄素是从中药姜黄根茎中提取的一种酚类色素，已被广泛用于食品色素和香料，具有抗炎、抗氧化、抗衰老、消除自由基及抑制肿瘤生长等作用  
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发表于 2023-7-15 15:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

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