通过细胞实验进行杜鹃素的药理作用的研究

杜鹃素为满山红及其他杜鹃属药用植物中的一种有效成分,药理学研究表明其具有镇咳平喘、抗炎、抗肿瘤和利尿等作用。有研究者通过细胞实验研究了杜鹃素的对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的保护作用,还有研究者通过细胞实验研究了杜鹃素的免疫抑制作用。一些公司提供的细胞实验服务括细胞活力实验、细胞增殖实验及细胞活性检测实验等。

一般认为各种因素造成的血管内皮损伤是动脉粥样硬化病变的始动环节,有研究者通过系统的细胞实验进一步研究杜鹃素对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用,为此化合物的生物活性提供新的理论基础,为预防和治疗动脉粥样硬化提供新的先导化合物。

1、采用MTT法进行杜鹃素抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

细胞实验服务中,常会采用MTT法测细胞活性,MTT法是利用活细胞的线粒体脱氢酶在代谢过程中将黄色的可溶性四唑盐MTT[3-(45-dinethylth-iazol-2-yl)-35-diphenyltetrazo lium bromide] 还原为不溶于水的蓝紫色产物-甲臢晶体,晶体生成的量与活细胞数量和细胞活化状态呈线性关系。提取出甲臢晶物后,使用合适的裂解液如二甲亚枫溶解沉积在细胞中的甲臢晶体,通过酶标仪测量该细胞液的吸光度值,便可检测出待测细胞样品的活性。上海美迪西提供细胞实验服务,可提供一套完整的生物学服务,包括从最初的cDNA文库构建到药物设计,通过蛋白质纯化,结构测定和分析测定等。

研究者采用MTT法检测细胞活力,相差显微镜和荧光显微镜观察细胞形态变化。结果采用51020μg/m L浓度的杜鹃素处理细胞后,内皮细胞活性呈浓度依赖性增加,细胞存活率提高;与H2O2组相比,细胞皱缩明显减少。杜鹃素20μg/m L可抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡。因此杜鹃素具有抑制H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的作用。

2、杜鹃素在BALB/c小鼠体内、外对T细胞的免疫应答作用

杜鹃素已被证明具有多种药理作用,如抗炎,抗氧化和抗癌活性。有研究者通过研究杜鹃素在BALB/c小鼠体内、外对T细胞的免疫应答作用,来评价其免疫药理活性,并探讨其免疫抑制作用的机制

体外实验结果表明,杜鹃素显著抑制ConA诱导的BALB/c小鼠脾淋巴细胞增殖、Th1Th2细胞因子的产生、CD4+T细胞群和CD4+/CD8+比率。此外,western印迹分析检测的信号转导机制显示,杜鹃素剂量依赖性下调NF-KBNFAT2信号转导通路的激活。体内实验结果显示,双耳称重,杜鹃素处理的DTH组与DTH组具有显著的差异,能明显抑制由DNFB引起的炎症反应;耳廓局部组织学检测也表明,杜鹃素能够抑制DNFB诱导的DTH,明显减少淋巴细胞的浸润;同时杜鹃素也能显著抑制脾淋巴细胞的增殖,对血清中IL-2IL-4IFN-r等细胞因子的分泌有抑制趋势。

杜鹃素具有潜在的免疫调节作用,可能作为一种免疫抑制剂来治疗与免疫有关的疾病,其免疫抑制机理可能是通过阻止NF-KBNFAT2信号转导通路的激活。

细胞实验结果显示杜鹃素对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤具有一定的保护作用,为临床用药提供了理论支持。而通过体内、体外细胞实验研究杜鹃素在BALB/c小鼠体内、外对T细胞的免疫应答作用,可评价其免疫药理活性并探讨其免疫抑制作用机制。