抑制肿瘤蛋白D52基因表达对结肠癌细胞凋亡的影响

肿瘤蛋白D52最早是从人乳腺癌中发现的,研究表明该家族基因在多种癌症中广泛扩增且蛋白表达水平升高。HCT116细胞是人结肠癌细胞,转染肿瘤细胞是研究肿瘤蛋白D52基因表达对结肠癌细胞的影响的关键。细胞转染技术服务常见于一些生物公司提供的服务中,转染即把核酸导入细胞,是当前生命科学研究中基本操作之一。通过将基因转染人类结肠癌细胞HCT116,观察转染后该细胞系的增殖及细胞周期的变化,可探讨基因外源性表达对肿瘤细胞的作用。

肿瘤蛋白D52(TPD52)是肿瘤诊断与分子靶向治疗中最有应用前景的候选蛋白之一,其可以参与肿瘤细胞增殖、侵袭、转移以及抑制DNA修复等生物学行为,并诱导机体产生对肿瘤的保护性免疫。为了探究抑制肿瘤蛋白D52表达对肿瘤细胞凋亡的影响,首先需要转染肿瘤细胞。细胞转染技术服务可将外源基因高效、安全地转入靶细胞,使用低毒、高效、价格低廉和使用方便的转染试剂药物是关键。

肿瘤蛋白D52在人的多种癌症中广泛扩增,人们在寻找能够提示乳腺癌发展变化中的新基因的过程中,第一次发现了D52的差异表达。接着在肺癌中发现了D52N8高表达。随着研究的深入,相继发现D52及其家族成员在前列腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌和肝癌中广泛高表达。有研究者探讨了抑制肿瘤蛋白D52基因表达对结直肠癌细胞活力、凋亡率及活性氧(ROS)含量的影响及机制

有研究者采用正常结肠NCM460细胞作为对照细胞,分别用RT-PCRwestern印迹分析法检测人结直肠癌Caco2SW480HCT116HT29细胞TPD52mRNA及蛋白表达。以LipofectamineTM2000为载体,将抑制TPD52表达的siRNA(TPD52-siRNA)及阴性对照siRNA(NC)转染HCT116细胞,转染48h。为获得蛋白质的高表达产量,必须先转染细胞,然后挑选一个稳定的转染细胞系进行蛋白的扩增和富集。而挑选这样一个细胞系往往需要花费数周甚至数月的时间,这既可能是由于试剂的细胞毒性也可能是由于转染的低效率。使用细胞转染技术服务可以培养大量状态良好的细胞用于后续实验。

然后MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率及ROS含量;western印迹分析法检测各组细胞增殖相关蛋白Ki67PCNA及凋亡相关蛋白BaxSurvivin的蛋白表达。结果发现TPD52基因表达抑制可降低结直肠癌细胞活力和诱导凋亡,机制可能与细胞内ROS水平提高及Ki67PCNASurvivin表达下调和Bax表达上调有关。

细胞转染技术服务的关键是高转染效率和低细胞毒性,即把核酸转入尽可能多的细胞,又要使转染了核酸的细胞尽可能多地存活,且没有发生分化。细胞转染是否成功的影响因素很多,如需要转染的细胞类型,需要被转染的分子(DNARNA、寡核苷酸、蛋白质),转染试剂等。细胞转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。美迪西提供细胞转染技术服务,其生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富广泛的经验。从最初的cDNA文库构建到药物设计,通过蛋白质纯化,结构测定和分析测定,提供一套完整的生物学服务。