巨噬细胞是一种免疫调节和效应细胞，可通过吞噬杀灭微生物、抗原递呈和分泌多种细胞因子等调控机体炎症反应和免疫应答。研究发现利用细胞转染技术的方法将目的基因整合至巨噬细胞基因组，用来表达外源基因，可以揭示巨噬细胞调控免疫反应的机制。一些公司提供的生物实验服务中包含的有细胞转染技术服务。
常见的细胞转染技术包括病毒转染、脂质体转染、电穿孔转染等方法。细胞转染技术服务指的是利用物理化学及生物介导等手段将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术服务。在生物相关的实验中，病毒转染具有操作简便、转染效率高、细胞病死率低的优势，能够大大提高基因的转导效率，以达到目的基因的高效瞬时表达。
脂质体转染成本低，但是细胞毒性较大，对细胞的正常生理活性影响严重。电穿孔转染、显微注射等物理转染方法存在设备昂贵、对技术、人员操作要求高等因素，限制了其在实践中的应用。美迪西提供生物实验服务，其在分子生物学、细胞生物学、体外生物学、结构生物学等生物学领域具有丰富广泛的经验，通过酶水平、细胞水平测定等技术平台帮助客户进行化合物筛选及化合物特性、作用机制及生物标记物分析等研究，保证了客户项目的有力实施，帮助客户推进药物研发的进程。
1、
什么是逆转录病毒转染法
逆转录病毒载体是通过人工改造的病毒基因组，缺失gag、pol、env野生型结构基因片段，不能自身包装成病毒颗粒，必须依赖于含有完整gag、pol、env基因的包装细胞。因此首先应将重组质粒转染包装细胞，磷酸钙共沉淀法常用于包装细胞的转染。将逆转率病毒质粒载体瞬时转染包装细胞，通过筛选获得能够稳定产生较高滴度病毒的细胞克隆，用这种包装细胞生产的逆转录病毒上清液直接进行细胞转染，从而使目的基因在目的细胞中获得表达。
逆转录病毒转染的特点：
（1）转染效率高适用于难转染细胞的转染；
（2）运用病毒介导转染，外源基因整合较为稳定；
（3）逆转录病毒只选择感染分裂细胞；
（4）容纳外源基因长毒<8kb。
逆转录病毒可以将携带的目的基因整合至分裂期细胞的基因组中，从而稳定表达目的蛋白。巨噬细胞在机体中具有调控组织平衡、抗原提呈、创口修复等功能，是血液、淋巴和所有哺乳动物组织类型中所见的吞噬细胞。研究发现原代巨噬细胞比巨噬细胞系更接近生理状态，能够准确揭示巨噬细胞在体内调节免疫反应的规律。有研究者利用逆转录病毒载体感染原代巨噬细胞，探索逆转录病毒载体感染的规律，并发现高效感染和表达外源蛋白的方法。
2、逆转录病毒在转染巨噬细胞上的研究
研究者利用HEK293T细胞包装携带GFP标记的逆转录病毒载体，分别感染处于不同分化阶段的巨噬细胞，通过检测细胞的生长状况和GFP阳性细胞比例，探究感染时间对病毒感染效率的影响[1]。结果表明，在巨噬细胞分化的早期阶段感染重组的逆转录病毒效率最高，并且对细胞的分化和增殖无明显影响。接下来，利用此方法研究了MKP5对I型干扰素表达的调节作用。通过构建和包装表达MKP5的重组逆转录病毒，在巨噬细胞分化后的第一天进行感染，然后进行Western杂交和实时定量PCR分析。
采用这一感染条件，不仅检测到大量外源MKP5的表达，并且发现过表达MKP5能显著抑制LPS诱导的IFN表达。因此在巨噬细胞分化早期感染逆转录病毒，可以有效地表达外源目的蛋白，研究这些蛋白分子在巨噬细胞中调控免疫反应的功能，为今后的免疫学研究提供了一种行之有效的技术方法。
巨噬细胞是重要的免疫调节细胞和免疫效应细胞，在机体内发挥多种生理功能，巨噬细胞通过凋亡完成其作用。研究发现在巨噬细胞分裂早期感染逆转录病毒的方法可以有效稳定地表达目的蛋白，进而研究巨噬细胞对免疫反应的调节功能，为免疫学研究提供了实验方法。
[1]逆转录病毒感染小鼠原代巨噬细胞的方法[J].
