免疫组织化学是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，利用在组织细胞内进行的特异、灵敏和稳定的抗原抗体反应，从而检测特异抗原物质和抗体存在部位的科学。一些公司提供免疫组化染色服务。
1、免疫组织化学的主要步骤
做免疫组织化学试验，首先是多克隆和单克隆抗体的制备，用酶、生物素或荧光素等作为抗体的标记物。标记的抗体与组织中待测物质共同孵育，使之特异性结合。最后染色，使得标记抗体上的酶、生物素或者荧光素等显示出来。在抗肿瘤药物的研发过程中，免疫组化技术对于研究肿瘤的发展规律，进行良恶性分类及鉴别诊断具有重要的作用，因此在做此类实验过程中一定要加倍谨慎起来。美迪西是一家临床前CRO公司，提供免疫组化染色服务。
然而在免疫组化染色过程中容易产生非靶抗原的呈色结果，成为非特异性染色、背景着色，能够严重干扰免疫组化染色结果的正确判断。全片着色是指整个切片全都染上了颜色，着色的强度可深可浅，总之，分不清那些组织是阳性那些组织是阴性。
2、免疫组化全片着色的主要原因
出现全片着色的原因有：
（1）抗体浓度过高
一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。
（2）抗体孵育时间过长或温度较高
解决办法是，严格执行操作规程，最好随身佩带报时表或报时钟，及时提醒，避免因遗忘而造成时间延长。现在流行的二步法敏感性很高，要求一抗孵育的时间不是传统的1小时，而是30分钟，因此，要根据染色结果进行调整。
（3）器皿和玻片清洗不干净
器皿和玻片应该用肥皂水洗净，自来水充分冲洗、烤干，磷酸洗剂浸泡过夜，自来水冲洗，烤干备用。特别是做免疫荧光时，载玻片或盖玻片应无自发荧光。
（4）DAB变质和显色时间太长
DAB最好现用现配，如有沉渣应进行过滤后再用。配制好的DAB不应存放时间太长，因为在没有酶的情况下，过氧化氢也会游离出氧原子与DAB产生反应而降低DAB的效力，未用完的DAB存放在冰箱里几天后再用这种似乎节约的办法是不可取的。DAB的显色最好在显微镜下监控，达到理想的染色程度时立即终止反应。不过当染色片太多时或用染色机时，这样做似乎不现实，但至少应对一些新的或少用的抗体显色时进行监控，避免显色时间过长。
（5）组织变干
修复液溢出后未及时补充液体、染色切片太多、动作太慢、忘记滴液、滴液流失等都是造成组织变干的原因。解决的办法是操作要认真仔细，采用DAKO笔或PAP Pen在组织周围画圈，可以有效的避免液体流失，也能提高操作速度。
（6）切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长
切片在缓冲液或修复液中浸泡时间太长，大于24小时。有的实验室喜欢前一天将切片脱蜡至修复，第二天加抗体进行免疫组化染色，如果将装有切片和修复液的容器放在冰箱过夜，对结果无明显影响，如果放在室温，特别是炎热的夏天，会出现背景着色，因此，不可存放时间太长。
（7）抗体变质
注意抗体的有效期，过期的抗体要么不显色要么背景着色。用新买的抗体时最好设立阳性对照和用使用过的抗体作比较。反复冻融会降低抗体效价，新购买的抗体可以分装成可一次性用完的小包装。用PBS稀释的抗体不能长期保存，在4℃可放1~3d，最好当天使用，超过7d效价显著降低。
