浅析放射免疫分析技术在免疫原性检测上的应用

放射免疫分析技术为一项生物分析技术,它应用放射性同位素标记抗原或抗体,通过免疫反应来测定标记抗原抗体复合物中放射性强度的改变。该技术将放射性同位素测量的高度灵敏性、精确性和抗原抗体反应的特异性相结合,可体外测定超微量的物质。放射免疫分析技术可以用于免疫原性检测、激素类检测、肿瘤检测及放射受体分析等。

免疫原性是指机体对治疗性蛋白产生的免疫反应或导致免疫相关的临床副作用,轻者可表现为无临床现象的短时反应,重者产生过敏性并发症、免疫功能失调等,甚至会威胁患者的生命。免疫原性检测一般包括抗药抗体检测和中和抗体检测,抗药抗体能对药物暴露、药物毒性作用、药物代谢动力学、药物效应动力学等造成影响。目前可通过多种方法可用于抗药抗体的检测,包括酶联免疫法(ELISA)、放射免疫检定法(RIA)、放射免疫沉淀法(RIPA)、表面等离子体共振(SPR)、电化学发光法(ECL)。每一种检测方法均有其优点和局限性。美迪西提供免疫原性检测服务,主要使用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、非人灵长类动物做免疫原性和免疫毒性试验。

生物分析技术放射免疫分析(RIA)可以利用放射性核素标记抗原或抗体,然后与被测的抗体或抗原结合,形成抗原抗体复合物的原理来进行分析的。有研究者进行了RIA在免疫原性检测上的研究。

1、RIA技术研究空间环境对黑色素瘤B16细胞免疫原性的影响

研究者探讨了空间环境对黑色素瘤B16细胞增殖及免疫原性的影响。选择4株经体外实验筛选出生物学性状变异明显的第20颗返回式卫星搭载的空间培养B16细胞,检测其体内增殖能力及免疫原性的变化。将筛选出的4株空间培养B16细胞接种于C57BL/6小鼠,其中一组接种于腹腔,观察荷瘤小鼠生存期;另一组接种于腋下皮肤,检测小鼠出瘤时间。接种至2周时,处死,分离荷瘤小鼠移植瘤和血清。称重荷瘤小鼠移植瘤,观察空间培养B16细胞增殖能力;利用HE染色法观察荷瘤小鼠移植瘤切片细胞形态。

采用放射免疫分析法测定荷瘤小鼠血清白介素-2(IL-2)浓度,观察空间培养B16细胞免疫原性变化情况。与对照细胞相比,1株空间培养B16细胞的荷瘤小鼠生存期明显缩短,出瘤时间明显延长。HE结果显示,此株空间培养B16肿瘤组织内有淋巴细胞浸润;RIA结果显示,3株空间培养B16细胞荷瘤小鼠血清IL-2浓度明显增加。空间环境的复合因素可诱导B16细胞增殖能力及免疫原性产生变化。

2、RIA技术检测乙型肝炎疫苗在不同种属的免疫原性

也有文章报道了用豚鼠效力试验评价巴斯德研究所生产的乙型肝炎疫苗免疫原性的重复性和敏感性,比较了该疫苗在不同温度下的稳定性以及在豚鼠、小鼠和人体中的不同免疫原性。免疫原性试验所用疫苗分商品疫苗和实验疫苗两种。商品疫苗每ml5μgHBsAg,吸附在AlOH3上,以未稀释和生理盐水连续稀释的疫苗,皮下接种300350g雄性豚鼠,28天后采血用RIA检测抗体。>50RIA单位为阳性.然后与参考标准疫苗比较结果,计算相对效力(RP);实验疫苗含51.250.312μgHBsAg,佐剂同上。皮下接种豚鼠每种疫苗各1ml6周龄雌性小鼠用连续稀释。

放射免疫分析技术的出现使得那些被认为无法测定的极微量而又具有重要生物意义的物质得以精确定量,是人们有可能在分子水平上重新认识某些生命现象的生化生理基础,该技术在免疫原性检测上的应用有很多。RIA具有灵敏度高,特异性强,测量简单,成本低等优点,具有一定的生命力,然而由于该技术存在使用放射性核素,此外标记有效使用时间短、难以实现操作和测量的自动化等缺点,它的未来发展前景存在局限性。然而目前RIA和其它放射示踪技术仍处在不断更新换代发展阶段,值得我们继续关注。