western-blot实验常见问题及解决方案

常见问题                                                                              解决对策

两块玻璃板之间灌胶,胶总是不平                              玻璃没有洗干净,应该洗得很干净
                                                                                      过硫酸铵和TEMED加量相对较多
                                                                                                  加完试剂后应摇匀
           

            总是漏胶                                                                     避免玻璃边缘(与胶条接触处)破损
                                                                                 将两块玻璃板摆放对齐,底部处于同一平面
                                               

         膜上有明显气泡                                                               操作时将气泡完全排除
                                                                                              靠膜一侧的滤纸应铺平



            特异性低                                                                                  优化一抗
                                                                                             提高一抗和二抗的稀释度
                                                                                      降低SDS-PAGE中蛋白的上样量


              背景高                                                                                  优化封闭液
                                                                                          优化洗涤缓冲液,增加洗涤次数
                                                                                                        减少曝光时间
           

              信号低                                                                                 优化一抗
                                                                                                         浓缩样品
                                                                                    选择更高灵敏度的发光液,如Enlight等。