[讨论帖]“黑胶虫”问题 - 经验共享

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标题:[讨论帖]“黑胶虫”问题

one[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:33 资料个人空间短消息加为好友

小中大

可能就是所谓的黑胶虫，我们实验室昨天刚发现这种情况，细胞消化离心后，在离心管底部肉眼都能清楚地看到黑色的颗粒！
不知道该怎么做才好

小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的内皮细胞也发现了类似的现象，我估计是这个问题，有很多小小的黑色颗粒，因为我买的血清是国产四季青的，我决定换成paa的，看是否还有问题

月牙牙[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:34 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的是PC12细胞里面也有好多小片片黑色的。可是又复苏一枝还是有，细胞现在长得很慢，不知是不不是这原因

lixi559[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的人的肝细胞也出现类似上面楼主说的“黑胶虫”。自己的观察和楼主还是有点区别：我用条件培养基(不含血清和二抗)长期培养细胞，每两天就更换，新配的培养基。在培养一个星期就出现类似“黑胶虫”的东西。胞浆和上清中均有那种东西，换液以后好像澄清了一点，第二天又出现了，这东西对细胞的生长也有些影响，细胞有的脱落死掉了。因为培养时间不久，还不知道是细胞在培养的过程中本身的原因还是黑胶虫的的影响。可以肯定可以和细胞共生。奇怪的是：我在用含血清（PAA公司小牛血清）培养基作对照的六孔板中发现，那上清中却是澄清的，三个复孔也是澄清的。
1.当时怀疑是我是不是没加二抗的原因，后在条件培养基中加入二抗以后，发觉效果还是不明显。
2.怀疑是不是条件培养基本身就含有那东西，于是将一部分培养基也放入培养瓶中培养。也没发现有那东西。
最后个人的结论：这种东西在可能本身就寄生于人和动物的细胞内。二抗对其效果不明显。血清中可能存在有一种物质可以抑制其生长。细胞离开特有的免疫环境，很多被抑制生长的，寄生于细胞内的生物就开始生长，这种情况类似于HIV感染引起的感染一样。
解决的办法也是很迷漫。至今也没什么办法。
在和群友们的的交流和学习中找到对付这种黑胶虫的办法。

泡泡[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我现在有点怀疑是不是支原体污染，今天我做了一个小小的测试，把不加任何细胞的培养液在加到一个小皿中，同时穿了一瓶被污染的细胞，6小时后观察，只有传代的有小黑点在动，只加培养液的小皿里面没有，我想这已经说明不是血清的问题，是不是也说明不是黑胶虫污染，而是支原体的问题呢？

泡泡[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:35 资料个人空间短消息加为好友

小中大

作了一个小小的测试，又感觉不是黑胶虫污染了而是一般的支原体什么的，测试如下：
我把新鲜的培养液加到一个小皿里面，里面不加任何培养物，6小时后观察，结果没有小黑点出现，而传入细胞的那一个一定有了？这是不是说明血清没有污染，也间接的说明不是黑胶虫污染呢

ffooll[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我养的细胞也出现了你说的情况,老师说使衣原体感染,可是不知道怎么检测是衣原体感染?老师没说我也不知道.能告诉我吗?谢谢了!还有啊我分别培养了胰酶和培养液感觉培养液里有了,可是别人和我用的是同一种培养液怎么没事呢?好奇怪啊!!

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:36 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有关血清使用中的常见问题解答

有关血清的问题，数十年来我们始终面临的是同样的问题。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考：

1.保存血清最好的办法？

我们建议血清应保存在-5℃至-20℃。若你一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。

2.如何解冻血清才不会使产品质量受损？

我们建议您将血清从冷冻箱中取出后，先置于2-8℃冰箱中使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

3.血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理？

血清中沉淀物的出现有许多原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性造成的；而血纤维蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成血清沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。

若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管中，以400g稍微离心，上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。

4.何谓热灭活？有必要做热灭活吗？

一般以56℃，30分钟来处理已解冻的血清，因为此加热步骤，可以使补体去活性，而补体所参与的反应有：溶细胞活性，平滑肌的收缩，肥大细胞和血小板组胺的释放，增强吞噬作用，淋巴细胞、巨噬细胞的趋化和激活。

实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经过处理的血清对细胞生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。

而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使研究者认为是微生物的分裂扩增。

因此我们建议您，若非必须，您可以不需要做热灭活这一步。如此以来，不但节省您宝贵的时间，更确保您血清的质量！

5.如何避免沉淀物的出现？

我们建议您在使用血清的时候，注意正确的血清解冻步骤，并尽量避免灭活血清及长时间的将血清置于高温环境中。

来源：cuturl('http://www.perbio.com.cn/Hyclone/page/note.htm')

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我认为所谓”黑胶虫“应该是血清中的物质在热灭活后形成的聚合物，在常温下做无规则的布朗运动，看上去像虫子而已。因为血清中的营养物质聚合，变得不能被细胞利用，所以细胞失去营养支持，逐渐”状态不好“，甚至死亡。

爱老虎游tt[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:37 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞昨天下午观察时，在培养基中也观察到了做布朗运动的“小黑点”。
今天看了群友们的帖子，有了进一步的了解。
可是，我到底该如何解决呢？
有没有明确的解决方案呢？

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