[讨论帖]“黑胶虫”问题 - 经验共享

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标题:[讨论帖]“黑胶虫”问题

wu11998866[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这些天正为这些“小黑点"烦恼,细胞状态明显变差.变圆,脱落。悬浮细胞也有同样问题。今天重新复苏，看一看。谢谢各位了！

克隆鱼[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我的细胞也是在前一段时间出现问题，不长，变圆，脱落
最近将原来用过的全换了，重新复苏，细胞状态还是不好，已排出血清问题
真是挠头

tieshazhang[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:38 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我也遇到这样的问题,不知怎么回事?细胞长的好慢

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这种事情我也遇到过，我认为是支原体污染，一旦发现污染则只能丢弃细胞，并将培养室全面熏蒸，才能保证以后不出现问题。

园丁##[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:39 资料个人空间短消息加为好友

小中大

“最后个人的结论：这种东西在可能本身就寄生于人和动物的细胞内。二抗对其效果不明显。血清中可能存在有一种物质可以抑制其生长。细胞离开特有的免疫环境，很多被抑制生长的，寄生于细胞内的生物就开始生长，这种情况类似于HIV感染引起的感染一样。”
我观察到的现象和群友一样，我养的是u251细胞，刚开始养在皿里面的时候有双抗有血清，生长很好，两天传代一次，之后我就开始铺在12孔板作转染，作转染的时候我们是换无血清无双抗培养基，而且转染之后不换液培养48h，结果全面污染了，我想可能是操作有问题，重复了一次又失败，我觉的我手气不好，就另请同学做了一次，铺板转染全是她做的，结果也是全面污染，我想是不是因为在皿里面养的时候一直加双抗抑制了细菌的生长，有隐性污染，我就换了无双抗有血清的培养基培养细胞，结果还是长得好好的，两天传代，一点问题都没有，我想做转染唯一换了条件的就是换成无血清培养基，那些细菌一样的东西就出来了，后来我就把皿里面的培养基换成双无只1640的培养基，结果24小时之后，那些东西就按耐不住，全钻出来了，我也觉得它们是寄生在细胞里面的，就像人体的寄生虫一样，血清撤掉了，没有营养了，它们饿了就全钻出来了，说得比较通俗，见笑，我被这株细胞搞得心慌慌的，也不敢动其他细胞了，害怕造成交叉污染。这种东西藏的很好，细胞正常培养是一点问题都没有，好的不得了，混在好细胞当中，要是他把别的细胞给污染了，我就要气死了。最后他全面释放出来的时候像是细菌污染，因为培养基变浑浊了，细胞全都死了，它密密麻麻繁殖了很多，浮在培养基上。我也搞不清楚到底怎么回事，也没有办法解决，仅提出自己的实验现象供大家参考。

缘yuan[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:40 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天看了好多黑焦虫的帖子，感觉大家都有过这种经历，我的细胞现在也是这样，刚开始长的好好的，但是等传了10代后就突然长不起来了，细胞没有污染，开始怀疑是支原体。于是重新复苏细胞，更换营养液，血清，等好不容易长满，结果一传代细胞又不行了。主要症状就是细胞贴壁不好，瓶上没有细胞的地方充满了白色发亮园颗粒，营养液清亮，但发黄。
又重复复苏几次，还是照旧。老板就说我的无菌操作不行，已经不敢复苏细胞了。信心全无啊，实验被迫停止。
感觉大家说是黑焦虫但没有确实的依据，那位大大能给大家发个有确切报道的文章，如果那位大大英文可以的话，能否给找点外文资料？？？

HP007[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我和楼上的缘yuan的情况极为相似.我前两天复苏了一管别人冻存的小鼠成纤维细胞,长得还可以,四天后传代了1托3,今天是传代后的第二天发现三瓶中有一瓶的培养液很快就变成橘黄色,另外两瓶还可以. 于是我就把那瓶变色的换液了,可是换完液就觉得又变黄色了, 镜下观察细胞很不规则,胞核有的就看不到,而且胞质和胞核里面有很多黑色小点.

附件

2011-12-8 15:41

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一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

发个必定被砖的贴。
我觉得对于黑胶虫的定义非常需要规范化。我对这种东西持保留态度，一是我自己还没有遇到过，二是我们的的确确还不知道这种所谓的“微生物”本质是什么东西。也就因为界定的模糊，现在有很多同行遇到问题很容易就往“黑胶虫”上归咎，其实很有可能只是细胞状态不好时漂点碎片，包括支原体污染导致的，或者血清灭活时间长了出沉淀之类，可一旦归咎于“黑胶虫”，就好像名正言顺的成了“不可抗力”：反正我也不知道是怎么回事，姑且就当是“黑胶虫”吧。可能进来的同行看到这里砖头已经举到半空了，但我认为这问题是确实存在的，需要大家重视。除了上面几位令人尊敬的积极做实验证实的同行们，进这贴的人可能有很多都是细胞不明原因的状态不好，进来看看能不能靠上“黑胶虫”的边的。
我们是做科学的，而现在“黑胶虫”已经快成了我们科研中的迷信，请慎重讨论“黑胶虫”，不要轻易用一个不知道是什么的东西来试图解释手中的现象，希望你相信自己的困惑是可以用我们目前已知的原因解释并且可以解决的，认真寻找原因才是正道。

中国特色[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:41 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我们用泰乐菌素消除过一次黑胶虫.不知是否有依据,反正当时是死马当作活马医,后来就没用泰乐菌素了.

guagua[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:42 资料个人空间短消息加为好友

小中大

今天观察前几天复苏后传代的细胞（MDBK），症状：细胞瓶里面已经没有贴壁的细胞，为了知道还有没有东西在长，早晨换液，DMEM+10%血清，结果晚上7点观察营养液已经变黄，但还是清亮。什么东西再长？？400倍观察瓶上有许多聚成团的黑色颗粒样物质，还有少量分布均匀的小颗粒样东东。实验条件没有办法照相，无法贴图。

同一培养箱内别人的细胞（ST，BHK）表面也有了好多黑色的颗粒，真的象有的大大说的能空气传播？

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