[讨论帖]“黑胶虫”问题 - 经验共享

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标题:[讨论帖]“黑胶虫”问题

生物迷[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有点意思。自己遇到过。但是对此“黑胶虫”保留态度，认为和血清有一定关系。
而“虫子”、还有所谓“专杀培养基”觉得有点夸张了，还是“全世界范围普遍存在，解决该问题是一个世界性难题。哈哈，这样的话多少科学家会自动放下手中的工作，暂时攻克这一“世界性难题”？
科学发展至今，科学疯子们会容许这样一个模棱两可的未知生物在眼片地下而置之不理？

缘yuan[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

这几天一直被这所谓的"黑胶虫"折磨,刚刚取材的胎鼠成纤维细胞就被他给污染了,密密麻麻,像黑沙子一样多,成布朗运动,细胞根本就不贴壁,有些贴壁的也被他干扰的胞体变得很搜小,最后崩界,最典型的是看到一细胞质内满满的那东西,细胞在原地抖动,镜下很明显!!细胞好像在挣扎,很痛苦!! 而且发现没有细胞的培养液没有那黑东西,从有黑东西的培养瓶中吸出的培养液再培养那黑东西就会不动了,贴在壁上,有活细胞它就会复苏!!!他和细胞好像是共生的!!不知道这种黑东西到底是什么?难道这么多的人就没有一个真正知道的,泱泱大国难道连一个在光镜下可以看到的东西都鉴别不了????!!期待有识之士尽快搞清楚到底是什么

wu11998866[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

类似的情况，形态和特征与大家说得都一样。细胞完完了!不知如何解决

hold住[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

磷酸钙很有说服力

fqswdzd[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我最近培养细胞的时候也遇到这种情况。
空的培养液，血清都做了实验，也都有小黑点。
不能肯定到底是污染还是所谓的‘黑胶虫’。
不管是什么，哪位有经验的战友，能说说要采取什么办法才可以挽救？

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我今天作了一个小小的测试，又感觉不是黑胶虫污染了而是一般的支原体什么的，测试如下：
我把新鲜的培养液加到一个小皿里面，里面不加任何培养物，6小时后观察，结果没有小黑点出现，而传入细胞的那一个一定有了？这是不是说明血清没有污染，也间接的说明不是黑胶虫污染呢？

==============================================================================================================

我个人觉得不能说明什么问题。因为很多现象说明，黑胶虫是寄生予细胞，而且与细胞呈现营养竞争的，所以你的实验可比性应该不是很大，也说明不了什么。

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:48 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我最近培养细胞的时候也遇到这种情况。
空的培养液，血清都做了实验，也都有小黑点。
不能肯定到底是污染还是所谓的‘黑胶虫’。
不管是什么，哪位有经验的战友，能说说要采取什么办法才可以挽救？

===============================================================================================================

近两天我也有遇到同样问题。在高倍镜下观看，现象很恐怖，有些让人恶心的感觉。同意观点：血清所致。换进口血清，并彻底打扫实验室，熏蒸。明天我就这样做！！！真叫这个咚咚给气死了！害了我的原代，也害了我复苏的细胞。细胞培养者的公敌！~~~~~~~~~~
气愤中。。。。。。。。。。。。。。

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

还有阿，我在高倍镜下看到的好像不是小黑点阿，是些黑色的细长的东西，不停的布朗运动，繁殖甚快。
难道不是同仁们所说的黑胶虫？？

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

在别处看到的，转载来，大家看看：

有人认为是“黑胶虫”，也有人认为是支原体，还有些专家更倾向于是非微生物，系血清中的杂质。下面就我所知道的谈谈两者的情况和对付方案把：

“黑胶虫”
胶虫成熟后呈线状,可以快速移动。而且形态是椭圆形，作不规则布朗运动。如果血清从-20取出后在室温下融化就易出现“黑胶虫”，建议血清在4度融化。加入双抗后好像能够抑制生长（具体原因不明，抗生素应该对细菌起作用）。

建议：
一、停止复苏，停止养细胞，彻底消毒所有用于细胞培养的一切用品，包括所用的培养瓶，培养基，吸管，胰酶，孵箱，超净台、空间等等你能想到的和细胞培养相关的所有物品。一个星期后，再复苏污染之前冻存的细胞，注意你的白大衣衣袖污染即可。这样你可能觉得动作太大，但可以用一个星期的时间挽救两个月的时间，还有其他你为了找到污染源，去除污染所耗费的精力，和财力。

二、如用伯氨奎、磺胺、四环素、贝尼尔，也有建议庆大霉素500ug/ml洗涤。如果细胞非常珍贵，可以用PBS多洗几次，培养基内加浓度高些的抗生素，勤换液，勤观察。

三、所有东西最好重配；如果实在要抢救，重点突破，留几瓶污染不是很严重的细胞抢救，其余弃去．

四、另外尽量用质量好的血清，当然最好是进口胎牛血清（国产血清太脏），就是价格高的离谱，经济条件不允许，可以用进口新生牛血清代替。建议如果使用的是Hyclone或GIBCO的血清可不必灭活，这样可以有效减少“小黑点”的形成。

支原体污染
由于口腔支原体为人体口腔中之正常菌丛，实验室之操作人员的污染亦可能为污染源，须十分注意。而万一细胞已受支原体污染时，最佳的处理原则为将细胞高压灭菌后丢弃，以免污染其它洁净的细胞株。但是若是坚持要作去除支原体污染，有以下几种方法，只不过结果会与原始的细胞特性有差异。
去除支原体污染：
1. 抗生素处理：BM-cyclin（Roche），MRA（mycoplasma removal agent，ICN），Ciprofloxcin（Bayer），Enrofloxacin（Bayer）
2. Nucleic acid metabolites：5-bromouracil，Hoechst 33258，bromodeoxyuridine
3. Anti-sera
预防与控制方面可从以下各点加强注意：
a)设备方面：
1. 使用已作支原体测试ok的细胞株
2. 于另一隔离之区域操作未知是否有支原体污染的细胞
3. 使用不添加抗生素的培养基培养细胞
b)检测方面：定期以标准的支原体检测方法检测细胞、培养基、血清、ddH2O有否被支原体污染。
c)实验操作人员的无菌观念与无菌操作技术的要求

vvmmoy[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:50 资料个人空间短消息加为好友

小中大

HYCLONE给的解释如下：

附件

2011-12-8 15:50

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