[讨论帖]“黑胶虫”问题 - 经验共享

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标题:[讨论帖]“黑胶虫”问题

guagua[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我以前也有这种问题。最后把那些污染的细胞都扔了。换了进口的血清就好很多了。还要注意细胞室、培养箱、何超净台的消毒

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:55 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我做细胞培养工作已经有二十余年,上面提到的“黑胶虫”问题经常碰到,采取了许多措施也不易挽回被污染的细胞,后来每次发现有这种微生出现时,我就吸取少量液体进行高渗培养,结果大部分标本培养出细胞L型,少部分标本经过很长时间仍不能诱导培养出L型菌生长.分析认为:在正常高渗培养时,也会有一部分标本培养不成功,这是主要原因,这些“黑胶虫”主要来源于细胞培养板,因此大家在做培养时一定要处理好培养用具.以免影响实验结果.

一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

再说两句:因为每次遇到的“黑胶虫”其形态是不一样的,我想许多同道也发现过类似的结果.而L型细菌具备形成多种形态的条件

乌贼老弟[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

建议先作菌检，我遇到这种情况时首先取瓶中的培养液涂布LB培养基，真的长菌了，应该是L型细菌。培养液不变混浊还真的不好发现

分子式[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:56 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我样的细胞有这样的情况，都要被这个小东西给折磨死了。处于同一培养箱的同一层的其它细胞就没有这样的情况，都要疯掉了啊！在操作上是严格按无菌的操作要求做的啊，真的是拿着小东西没办法吗？这到底是什么东西啊？

911[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

真是崩溃！我的情况也是如此。群友描述的很典型啊：那些小东西
一开始是小点点，像布朗运动似的活动，也有的像火箭似的游的快极了
后来变的长了一点，就像杆状的微生物，有振动的也有扭动的，在细胞周围
然后就变成绳索状了，基本是小团了（不规则形状）

原来那么多战友都遇到了啊！实验被迫中止了，所有的东西全重新高压，该扔的扔。

邓布利多[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:57 资料个人空间短消息加为好友

小中大

其实我也觉得这种东西的存在根细胞状态有联系。我接毒的细胞放时间长了，就会在200X光镜下看到在细胞空隙有细长的小颗粒（黑色）游动，并非原地颤动，但也就在细胞周围做无规则运动。我接毒之前，细胞状态良好，病毒拿滤膜过滤后接毒，24H后没发现，但48H后6个当中2个出现了。
另外还有一次，我们实验室新买的细胞做扩大培养准备冻存，复苏长好的细胞传到大DISH里，我看小方瓶里还有少许细胞，就加培养基一直养着，等细胞长得差不多了，消化了一次。我看自己要冻存的细胞没污染，就一直把小方瓶放那没管，过几天一看培养基黄了，里面还有小黑点游动，第二天细胞就大量死亡了，小黑点增多。我以为是细胞污染，立刻复苏了一只刚冻存的细胞，但养了两天了，复苏后一直没换培养基，细胞状态还很好，无小黑点。
因为培养基（进口），血清（进口），PBS，都用得同一瓶，所以觉得还是细胞状态不好才引发的该现象。我们老板也说可能是血清中的小颗粒，根细胞状态有关，新细胞不会有。

二丫头466[使用道具]
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发表于 2011-12-8 15:58 资料个人空间短消息加为好友

小中大

请问LZ，我养的THP-1细胞是不是也是这种污染？