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标题:蛋白质相互作用研究的技术之噬菌体展示技术

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蛋白质相互作用研究的技术之噬菌体展示技术

蛋白质是生命活动的主要承担者,一切的生命活动都离不开蛋白质,对于蛋白质的研究一直都备受科学家们的关注。蛋白质很少单独发挥作用,通常是以蛋白质复合物的功能占主导地位,随着科学技术的发展,研究者们对于蛋白质的探索也从局限于对一个蛋白质的研究,发展到对一个基因组所表达的全部蛋白质的研究。如今也有越来越多的公司提供了蛋白质组学服务,来从细胞水平上对蛋白质进行大规模的平行分离和分析。噬菌体展示技术是研究功能基因组和蛋白质与蛋白质间相互作用的一项比较成熟的生物技术。

蛋白质作为细胞活性和功能的执行者,其功能的发挥需要依靠蛋白质与蛋白质之间的相互作用,而不是凭借单个蛋白质独立执行的。蛋白质相互作用出现异常将会影响细胞活性和功能的发挥,从而导致神经退行性疾病、癌症等疾病。蛋白质间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。蛋白质组学服务可以帮助研究蛋白质间的相互作用。蛋白质间相互作用的研究技术包括免疫共沉淀、酵母双杂交系统、pull-down技术以及噬菌体展示技术等。

噬菌体是由核酸与蛋白质组成的一种病毒,其中蛋白质包裹着核酸,具有保护核酸和决定噬菌体的外形和表面特征的作用。噬菌体的基因组包含几个至数百个基因,基因组小,基因组成简单,因此被用作DNA重组技术的常用载体。噬菌体技术是一种用于筛选和改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术,广泛应用于蛋白质组学、基因克隆等多个分子生物学领域。美迪西在分子生物学、细胞生物学、体外生物学、结构生物学等生物学领域具有丰富广泛的经验,通过酶水平、细胞水平测定等技术平台帮助客户进行化合物筛选及化合物特性、作用机制及生物标记物分析等研究,保证了客户项目的有力实施,帮助客户推进药物研发的进程。

噬菌体展示技术可以筛选与已知蛋白相互作用的蛋白,该实验过程包括融合蛋白的制备、噬菌体文库扩增、生物筛选、淘洗、噬菌斑的PCR扩增、测序模板的快速纯化、序列测定及同源性分析。该技术能够把基因型和表现型有效的结合起来,使用特定受体筛选与其相互作用的噬菌体肽段,为蛋白质分子之间(如抗原与抗体、受体与配体、酶与底物)的相互作用提供理论依据。该技术包含在一些公司提供的蛋白质组学服务中。

有研究者利用噬菌体表面展示技术进行筛选转铁蛋白特异性黏附肽的研究。转铁蛋白是一种能传递铁离子的蛋白质,在大多数脊椎动物的血清中(血清铁传递蛋白)、蛋白中(伴清蛋白铁传递蛋白)和哺乳动物奶中(乳传递蛋白)发现的非血红素、铁结合的糖蛋白。转铁蛋白至少与两种不同类型的转铁蛋白受体相结合,即转铁蛋白受体1(TfR1)和转铁蛋白受体2(TfR2)。转铁蛋白受体存在与许多肿瘤细胞如肝癌、乳腺癌、胰腺癌等细胞中,这为转铁蛋白作为药物载体提供了希望。

转铁蛋白已经用于将诸如化疗药物、蛋白毒素和治疗性基因等细胞毒性药物靶向输送到肿瘤细胞中。因此研究者应用噬菌体表面展示技术从噬菌体随机七肽库(Ph D-7)中筛选转铁蛋白黏附肽(TfB)[1]。希望筛选得到的特异性TfB作为药物的标签以黏附的方式结合Tf,应用于TfR作为肿瘤靶标的靶向治疗。研究者经过3轮生物淘选,从Ph D-7噬菌体随机肽库中获得4个黏附Tf的重组噬菌体克隆,对其中阳性克隆测定相对亲和力常数,显示4TfBTf之间的相对亲和力常数都在微摩尔级,并对其进行DNA测序和序列比对,发现无相关性。筛选得到的TfB不仅可用于构建非共价连接Tf的靶向药物体系,也可用于长效化蛋白质类药物的研究。

噬菌体展示技术具有序列多样性大的特点,它能够在10^9个克隆筛选出一个,因而筛选功能基因更敏感,在对蛋白质与蛋白质相互作用的作图方面具有优势。然而由于噬菌体展示技术需要纯化的蛋白质作为靶分子蛋白,因此大规模蛋白质与蛋白质相互作用的鉴别可能会有很高的成本。目前噬菌体展示技术已经在功能基因组学和蛋白质组学的研究中广泛应用,在药物研发领域作用较大。

[1] 利用噬菌体表面展示技术筛选转铁蛋白特异性黏附肽的研究[J].


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你的名字写下来不过几厘米长,却贯穿了我这么长时光。其实你不知道,你一直是我的梦想。
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