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标题:[讨论帖]如何把细胞养的更漂亮

彼岸花opp[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们平常配的双抗就是链霉素100WU加5ml血清稀释，青霉素80WU加4ml血清稀释，然后各取0.25ml加入500ml的培养基里···不知道这样可不可以
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hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请教一下，第9步：“培养体系加入2ml双抗”，双抗是跟培养液按比例加的吗？我们一般每次换液加4-5ml培养液，那双抗应该加几ml？

PS：我们配出来的是100X的双抗，换算过来也只是10000IU/ml。只有楼主建议的浓度1/20...是否应该延长作用时间？

===========================

你浓度低就多加几毫升。5ml。。。
关键在于洗，而不在于双抗。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们平常配的双抗就是链霉素100WU加5ml血清稀释，青霉素80WU加4ml血清稀释，然后各取0.25ml加入500ml的培养基里···不知道这样可不可以

=========================

只要浓度控制到就可以。。。
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loli[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
只要浓度控制到就可以。。。

=========================================================================================================

你说的浓度，是配制时的浓度还是加到培养基里的终浓度啊？要多少比较好？

我看还有人加三抗的，不知道第三种是啥？

另外有人说加双抗其实对细胞生长不好，大意是容易有其他隐形污染之类的，而且对后续试验可能也会有结果，不知道各位的看法怎么样？
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发表于 2011-12-8 16:46 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你说的浓度，是配制时的浓度还是加到培养基里的终浓度啊？要多少比较好？

我看还有人加三抗的，不知道第三种是啥？

另外有人说加双抗其实对细胞生长不好，大意是容易有其他隐形污染之类的，而且对后续试验可能也会有结果，不知道各位的看法怎么样？

========================================================================================

终浓度。这个经过我的双盲实验结果显示，双抗并未有影响，结果没有显著性差别，而不加双抗的却容易污染。。。
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小螺号[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主大人，我做MTT时，复孔之前的OD值相差比较大，我想应该是细胞铺板时不均匀。铺板之前吹匀细胞我知道，可能是用排枪加细胞这一个动作没做好，因为我发现每次加完细胞枪头总是有些残余，而且每次残余量还可能不一样。所以怎么加细胞才能使复孔之前尽量均匀呢？
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hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #56 小螺号 的帖子

你的枪或者你的枪头的问题吧。。。细胞要用吹管吹打均匀。然后再用枪吸。
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BUK[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

谢谢楼主分享。那么悬浮细胞有没有什么比较好的办法呢？
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笑弯了腰[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

呵呵，不错，但是决定黑胶虫还是一个比较麻烦的东西，目前我们实验在做杂交瘤培养的时候一直能看到，貌似这个与无菌操作无关。一般情况下数量还是不多的，但特别是换了血清的批次后有时候会多点，觉得和血清的质量有很大关系。
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hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-8 16:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #59 笑弯了腰 的帖子

是这样的。黑胶虫最主要是来源于血清，尤其是澳洲血清和新西兰血清。北美的血清我没有发现过有疑似黑胶虫的污染。南美血清质量也不如北美血清。
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