细胞世界 » 讨论区 » 经验共享 » [讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

采购询价

点击提交代表您同意 《用户服务协议》 《隐私政策》

 
需要登录并加入本群才可以回复和发新贴

标题:[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

qqq111[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73201
精华 0
积分 830
帖子 1238
信誉分 101
可用分 7086
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-9-20
状态 离线
11
 
最近培养平滑肌细胞时遇到最大的问题是将其剪成1mm3的小块后怎么才能以0.5cm的间距均匀摆置于瓶底,我用剪刀剪后发现会得到很多块块,每块以点点大,用镊子夹也不可能一次夹一块,而且会粘在镊子上,很多时候放不下来,郁闷,大家可有这方面的经验?

===============================================================================================================

我用的是牙科探针,很老的那种,其实就是一根小木棒(筷子粗细),一端插一根细钢丝(要插紧),钢丝弯一点,就ok了。 用前高压消毒。组织块剪好后,加一,两滴培养基,用吸管吸到瓶子里面,顺壁流下, 然后用探针一块块摆好就ok,我每次贴都还可以。
祝早日养出细胞。
顶部
loli[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 71788
精华 0
积分 736
帖子 1171
信誉分 100
可用分 6650
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-8-31
状态 离线
12
 

我的经验是:在青霉素瓶里剪碎,D-Hanks冲洗1~2次,将上面漂浮的像粘液一样的浮快吸掉,这样小块就很干净,用弯头吸管种到培养瓶里就好摆了,用弯头吸管抹一下就可以了。
顶部
nn255[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 76746
精华 0
积分 652
帖子 1024
信誉分 100
可用分 5877
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-11-9
状态 离线
13
 
[color=Black正准备养人脐静脉内皮细胞(从ATCC购得细胞株),细胞还没有到货!期待中!
本人搞中医药复方的研究
顶部
yes4[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 77377
精华 0
积分 764
帖子 1145
信誉分 101
可用分 6575
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-11-16
状态 离线
14
 
我才开始原代培养人腹主动脉平滑肌细胞,在一个小木块上用手术刀切血管可以很容易的得到1-2mm的血管块,贴壁时采用接种针(细菌培养时也用过的,不过前面的铁丝弯成L型)将血管块移入培养瓶,还蛮好用的,大家可以试试。
顶部
北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
15
 

大家可以在这里都谈谈所用的培养液和血清的类型,我用Gibco的DMEM高糖及四季青公司的胎牛血清,浓度15%,正在等待结果。
顶部
duoduo[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 74511
精华 0
积分 705
帖子 1009
信誉分 100
可用分 5926
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-11
状态 离线
16
 

我用20的血清,也用过25的,15的可能稍偏小。传代时不可锐减!!
dmem中加了hepes,ph好象稳定多了,原代细胞对ph要笱希?荒芗睿?取材过程慢了,损伤大了,以后再好的条件也不行,就会失败!细胞先天不足啦!
个人的1点体会,见笑!
顶部
BOSS2011[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 74568
精华 0
积分 427
帖子 534
信誉分 100
可用分 3476
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-10-12
状态 离线
17
 
我用消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞的过程。与各位分享,也请指教。
用dmem配0.2%的1型胶原酶[用20的血清的dmem配可能更好,有类似文献},分装于青霉素小并,每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1并消化液中消化,消化约10几个小时{消化程度的把握要体会},离心后,接种{若见细胞量大,成功把握大},绝对静置3天{没必要看,看多了无益},8天可传代。
顶部
lixi559[使用道具]
四级
Rank: 4


UID 73492
精华 0
积分 560
帖子 820
信誉分 100
可用分 4896
专家分 0
阅读权限 255
注册 2011-9-23
状态 离线
18
 
我已经做了一个多月的大鼠主动脉内皮细胞的培养,已经试过消化法和机械刮法,效果不理想。消化法用的是有0.1%的的胶原酶、0.25%的胰蛋白酶以及胶原酶加胰蛋白酶三种消化,消化后还试着刮血管,对消化的时间也进行过比较30分钟、一个小时等都做过,对消化下来的东西不满意,养在培养瓶里好几天都不贴壁,杂质特多,可能是消化过了,希望能得到各位老师的指点
顶部
北风那个吹[使用道具]
三级
Rank: 3Rank: 3


UID 79353
精华 0
积分 232
帖子 162
信誉分 101
可用分 1561
专家分 10
阅读权限 255
注册 2011-12-10
状态 离线
19
 
还有兄弟们,今天我贴块法养的平滑肌细胞,等了5个小时翻转时还是浮起一大片,不知道什么原因,大家分析分析呢,看有谁碰到过的。
顶部
一叶[使用道具]
超级版主
Rank: 8Rank: 8


UID 73286
精华 0
积分 1481
帖子 2541
信誉分 100
可用分 13501
专家分 0
阅读权限 150
注册 2011-9-21
状态 离线
20
 

回复 #19 北风那个吹 的帖子

块大了,不易贴。愈小愈易贴。开始加的培养基少点,能盖上块就行。不必怕细胞差营养,这时细胞在适应新环境,代谢较低。翻转时动作要慢而清。
浮起一大片,我还没碰到。起初我干涸3h,后来干涸缩短为1h,浮起也不多。
祝好运!
顶部