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标题:[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

小野花[使用道具]
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用过内皮细胞株HMEC,如有需要可联系我。
目前正在战斗原代大鼠胸主动脉细胞,用的是急性酶解法,奋斗了很长时间,一直苦于得不到大量细胞。各位战友如有高招请帮一把 ,谢谢。
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一叶[使用道具]
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你用胰酶?
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小野花[使用道具]
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我用的是木瓜蛋白酶 0.5mg/ml, 冰箱过夜后, 37度孵育20min后吹散,但效果不好,细胞量较少。
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北风那个吹[使用道具]
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昨日打开培养箱准备换液,但是拿出瓶子一看,乖,培养瓶底有像泥沙一样的东西,想这难道是传说中的污染,赶快取出几瓶发生这种情况的细胞,只剩下前天刚做的还好。一下子悲痛不已,这是我辛苦了半个月的成果啊。就这样付诸东流了。
好好的反思:
可能与我前次换了培养液有关,我的培养液是用时临时加胎牛血清的,上次那瓶用完了,这次换新的胎牛血清。
而且上次又取组织又换液的,可能无菌操作也有问题。
最后赶紧把培养液又过滤了一遍。
想请教群友的几个问题:
1、这种情况是不是就是污染?
2、我平时换了培养液,加入培养箱后培养液马上会变得偏黄,不是像在箱外那样的红的或紫红的,但一般并不浑浊,不知这个有没有问题,一直心存疑虑。

唉,半个月没日没夜的奋斗竟然招致如此后果。
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duoduo[使用道具]
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大家好
请原谅我以商业目的进入严肃的学术讨论区域,希望各位不要介意。
给大家留些网址方便查阅资料:cuturl('www.cascadebio.com')
cuturl('www.sciencellonline.com')
cuturl('www.cellapplications.com')
希望会有帮助,谢谢各位!
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loli[使用道具]
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我用的是木瓜蛋白酶 0.5mg/ml, 冰箱过夜后, 37度孵育20min后吹散,但效果不好,细胞量较少。

======================================

有单用木瓜蛋白酶的文献吗,请告知文献名,谢了
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loli[使用道具]
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这种情况应该就是污染,我碰到多次。污染是头等大敌。只有扔。多少次,欲哭无泪!!!用酒精擦培养箱。
一般并不浑浊,不知这个有没有问题。没问题。
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loli[使用道具]
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这种情况应该就是污染,我碰到多次。污染是头等大敌。只有扔。多少次,欲哭无泪!!!用酒精擦培养箱。
一般并不浑浊,不知这个有没有问题。没问题。
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北风那个吹[使用道具]
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39
 

但是我看司徒镇强的书上写污染应该是有飘浮物,我的泥沙样的物质是沉在瓶底的啊。
下次留照片,希望不要再污染了。
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loli[使用道具]
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我用消化法原代培养兔胸主动脉平滑肌细胞的过程。与各位分享,也请指教。
用dmem配0.2%的1型胶原酶[用20的血清的dmem配可能更好,有类似文献},分装于青霉素小并,每并2-3ml。1只免的胸主动脉置于1并消化液中消化,消化约10几个小时{消化程度的把握要体会},离心后,接种{若见细胞量大,成功把握大},绝对静置3天{没必要看,看多了无益},8天可传代。
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