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标题:[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

04906[使用道具]
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41
 

我已经做了一个多月的大鼠主动脉内皮细胞的培养,已经试过消化法和机械刮法,效果不理想。消化法用的是有0.1%的的胶原酶、0.25%的胰蛋白酶以及胶原酶加胰蛋白酶三种消化,消化后还试着刮血管,对消化的时间也进行过比较30分钟、一个小时等都做过,对消化下来的东西不满意,养在培养瓶里好几天都不贴壁,杂质特多,可能是消化过了,希望能得到各位老师的指点,谢谢
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北风那个吹[使用道具]
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42
 
还有兄弟们,今天我贴块法养的平滑肌细胞,等了5个小时翻转时还是浮起一大片,不知道什么原因,大家分析分析呢,看有谁碰到过的。
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阿敏[使用道具]
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老板叫我做平滑肌细胞和内皮细胞,但做什么不知道,取什么地方的平滑肌和内皮细胞也不知道,只知道该药对心血管有作用,我现在一头污水,不知道怎么入手。
各位大侠,你们养平滑肌和内皮细胞做些什么药效呢,或者研究些什么?给我一点指点,不胜感激!
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一叶[使用道具]
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培养瓶底有像泥沙一样的东西。
血清。
无菌操作。
过滤。
问题:
1、这种情况是不是就是污染?
2、我平时换了培养液,加入培养箱后培养液马上会变得偏黄,不是像在箱外那样的红的或紫红的,但一般并不浑浊,不知这个有没有问题,一直心存疑虑。

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1、泥沙样的东西是支原体污染,特征是培养液不变黄也不变浑浊。
2、支原体污染是不能通过过滤方法去除的的,因为支原体直径0.1um,滤膜一般为0.22um。支原体污染很难去除,如果可以,最好是扔掉不要了,我试过好多方法,现在觉得比较有效的是:环丙沙星。正常抑菌浓度是1:200,杀菌加大浓度即可。
3、一般来讲,操作造成的污染多为细菌污染(可带手套防止,如果不带手套,切记手不能从任何开口的培养瓶、皿等物正上方经过),支原体污染多数为培液和血清来源。新配的培液可放CO2孵箱48小时检测,如果没有污染即可排除培液和血清问题。
4、培液颜色变化是正常的,只要没有浑浊、没有沉淀、没有絮状漂浮物(有些血清有絮状物,是蛋白析出,不是污染)都是正常的,因为细胞本身代谢就会使培液变酸。

祝你和你的细胞们好运!
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气泡[使用道具]
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20%胎牛血清+DMEM,玻璃瓶,组织块剪的很小,差不多一个小时贴壁
问题就是不见细胞爬出来,难道动作太慢造成先天不良?赫赫
培养过程中组织块周围有些胶状物铺展开,是细胞分泌的胞外基质吧?
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loli[使用道具]
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楼上最好用塑料并,
细胞分泌的胞外基质,我没见过,也没听过。
建议少动细胞,少看,让细胞自在的长。
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北风那个吹[使用道具]
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大家有没有平滑肌细胞7天,10天或20天后生长情况的照片,能不能发到网上来。
现在我的问题就是小块周围爬出很多东西,不知道是不是平滑肌细胞,我想这不是我一个人的问题,很多人都会碰到。

我们我们建一个平滑肌细胞培养的图库,把各个阶段的图片集中在这里。

还是希望我们的斑竹能配合一下,加分方面通融一点。当然,兄弟们的图片不能贴太粗糙的。
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loli[使用道具]
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现在我的问题就是小块周围爬出很多东西.
当然就是平滑肌,可喜可贺啊
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我养人脐静脉内皮细胞,发现应用中日友好医院临床研究所的内皮生长因子效果很好,细胞长得比进口因子好,而且便宜。20mg只需400元,可配置200ml培养液
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我养人脐静脉内皮细胞,发现应用中日友好医院临床研究所的内皮生长因子效果很好,细胞长得比进口因子好,而且便宜。20mg只需400元,可配置200ml培养液

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呵呵,用Roche的ECGF,15mg才650元,可以配750ml培养液(20ug/ml浓度),而且发文章也好交代。
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