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标题:[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

ffooll[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们培养的也是大鼠胸主动脉内皮细胞。但是最近半年出了一些问题，细胞在玻璃瓶里长的不是很好，必须在塑料瓶里养，而且还要铺一些辅助成分。原先不是这么糟糕的。我想请问高手怎么解决这个问题？希望得到大家的指导。
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:30 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

终于看到大片的平滑肌细胞了，但是这里一片那里一片的，有的地方没有，这可让我在什么时候传代啊？书上说是长满80％，不好控制传代时机了。
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一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:31 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
终于看到大片的平滑肌细胞了，但是这里一片那里一片的，有的地方没有，这可让我在什么时候传代啊？书上说是长满80％，不好控制传代时机了。

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原代培养就是这样的，有的块爬出的细胞多，有的少，还可能有的根本就没有爬出来，都是有可能的。长满80%意思是细胞占培养瓶总面积的百分比了。。。如果每个块铺的很均匀，而且每个块都爬细胞出来的话就可以这样操作，胰酶消化，吹打的细胞传到新瓶，原瓶还可以继续培养；但实际情况是如上所述，各不相同，所以看到有几块周围爬的细胞很多（既典型的波峰－波谷状），而其他地方块爬细胞不多的时候就可以消化吹打，但不要移入新培养瓶，直接在原瓶培养，过几天细胞就分布均匀了！祝你好运！
另，爬出来的东西是不是细胞一看就知道了，细胞是有形状的，平滑肌是长梭行，刚爬出来是先露一个小小的三角从组织块出来，全爬出来就是梭行了，爬满就是峰－谷状。。。如果只说大堆的东西，没有形状，肯定不是细胞！
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ffooll[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:33 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我培养的是大鼠胸主动脉内皮细胞。但是最近半年出了一些问题，细胞在玻璃瓶里长的不是很好，必须在塑料瓶里养，而且还要铺一些辅助成分。原先不是这么糟糕的。我想请问高手怎么解决这个问题？是不是我们养的细胞污染了？急盼答复！！！
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克隆鱼[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:34 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也加入一个，我要养人卵巢微血管内皮，用消化法，效果不好
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:36 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

还有这些是什么细胞？脂肪细胞还是内皮细胞呢？
和上次我的细胞被污染时那些东西好像啊！
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guagua[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:37 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Cell Applications有各类哺乳动物的平滑肌细胞卖，可以登录cuturl('http://www.cellapplications.com')
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铜雀[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近培养平滑肌细胞时遇到最大的问题是将其剪成1mm3的小块后怎么才能以0.5cm的间距均匀摆置于瓶底，我用剪刀剪后发现会得到很多块块，每块以点点大，用镊子夹也不可能一次夹一块，而且会粘在镊子上，很多时候放不下来，郁闷，大家可有这方面的经验？

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我把自己的经验说一下: 如果剪成的组织块稍大可用吸管吸取,如果组织块偏小,不妨试试用不同的枪接不同的枪头吸吸看(我做过很多次了,很好用),当然,组织块周围最好有些液体更好吸一些(液体也不可太多,否则组织块会在液体里跑来跑去). 用枪头吸组织块在培养瓶做可能会难度大一些,我多数都是在圆形培养皿中做.
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北风那个吹[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我把自己的经验说一下: 如果剪成的组织块稍大可用吸管吸取,如果组织块偏小,不妨试试用不同的枪接不同的枪头吸吸看(我做过很多次了,很好用),当然,组织块周围最好有些液体更好吸一些(液体也不可太多,否则组织块会在液体里跑来跑去). 用枪头吸组织块在培养瓶做可能会难度大一些,我多数都是在圆形培养皿中做.

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不知大家发现没有，不管是用滴管还是用枪，都有一个问题，组织块很多都粘在管壁上！对于组织本来不多的培养来说非常心疼的。我现在喜欢拿一根头端圆钝，一头弯的钢丝（直径1、2毫米吧）消毒后将组织块挑到瓶里，再拿它来摆放，方便的很，不粘组织的。不知算不算是发明创造。
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loli[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #59 北风那个吹 的帖子

你说的用你自制的钢丝操作很方便, 不知你如何操作?圆钝端和弯曲端各有何用图?请详细说明,我很感兴趣.多谢!!
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