[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进 - 经验共享

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标题:[讨论帖]养平滑肌细胞及内皮细胞的群友请进

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发表于 2011-12-10 13:46 资料个人空间短消息加为好友

小中大

平滑肌细胞的鉴定问题：
我很想和大家一起讨论一下平滑肌细胞的鉴定问题，很多群友都在鉴定细胞内有无α-actin的表达，我想这远远是不够的，因为成纤维细胞和肌纤维母细胞也有α-actin的表达，所以α-actin对于平滑肌细胞而言并不是特异的，而且原代培养中很难说没有成纤维细胞的混杂生长。大家有没有想过，除了α-actin外，有无其他可以鉴定的方法？比如：检测肌凝蛋白重链等等。

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发表于 2011-12-10 13:47 资料个人空间短消息加为好友

小中大

脐静脉内皮细胞原代培养

内皮细胞培养是体外研究内皮细胞功能的重要手段，人脐带静脉是人血管内皮细胞最易获取的来源，在内皮细胞的研究中被普遍采用。下面就脐静脉内皮细胞原代培养资料整理如下和大家共享：

原代培养方法：
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=2004658&sty=3&keywords=%C4%DA%C6%A4%CF%B8%B0%FB+%BC%F8%B6%A8')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1671048&sty=3&keywords=%C4%DA%C6%A4%CF%B8%B0%FB+%BC%F8%B6%A8')

内皮细胞形态
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1942997&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1942997')

内皮细胞鉴定
1．间接免疫荧光染色方法鉴定VIII因子相关抗原
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=1913259&sty=3&keywords=%C4%DA%C6%A4%CF%B8%B0%FB+%BC%F8%B6%A8+VIII')
免疫荧光照片
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1939365&sty=1&tpg=1&age=0')
2．免疫组化方法鉴定VIII因子相关抗原
免疫组化方法
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=266752&sty=1&tpg=1&age=0')

内皮细胞原代培养中的常见问题
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1528852&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1528852')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=1523237&tpg=1&ppg=1&sty=1&age=0#1523237')

分离\培养小鼠脑微血管内皮细胞加上鉴定的费用估算
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=2599546&sty=3&age=0&tpg=1&ppg=1#2599546')

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发表于 2011-12-10 13:49 资料个人空间短消息加为好友

小中大

平滑肌细胞的鉴定问题：
我很想和大家一起讨论一下平滑肌细胞的鉴定问题，很多战友都在鉴定细胞内有无α-actin的表达，我想这远远是不够的，因为成纤维细胞和肌纤维母细胞也有α-actin的表达，所以α-actin对于平滑肌细胞而言并不是特异的，而且原代培养中很难说没有成纤维细胞的混杂生长。大家有没有想过，除了α-actin外，有无其他可以鉴定的方法？比如：检测肌凝蛋白重链等等。

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成纤维细胞应该没有action吧。而由成纤维细胞分化来的肌成纤维细胞应该有action,但无myosin
.而肌成纤维细胞可分化成平滑肌细胞。
国内最近的文献多用action,myosin双鉴定。也有鉴定缬蛋白的。
请高人指教

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:52 资料个人空间短消息加为好友

小中大

成纤维细胞会有少量表达α-actin. liguofan" 提到的国内最近的文献多用actin,myosin双鉴定。也有鉴定缬蛋白的.",不知能否提供这方面的文章,不胜感激.

hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

小弟刚做小鼠平滑肌细胞培养不久，现在的状况很不满意，请教一下有关血管的分离，
看书上和人家做大鼠都是要仔细的分离外膜的，可是小鼠的外膜又薄，剥的仔细的话往往内膜都损伤比较多。对比剥和不剥的，我发觉还是后者容易爬出平滑肌样的细胞来。
现在细胞长的很慢，大多过了一周都爬不出来。希望有养过小鼠平滑肌的战友提点一下，谢谢

hyuu[使用道具]
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发表于 2011-12-10 13:53 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我认为这不是污染，镜下你会看见有大的黑色颗粒，这在传3代后细胞涨势不太好时常见；而且不易冲下，传代后仍有，可以把这样的早做实验用。个人意见仅供参考。

sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-10 14:05 资料个人空间短消息加为好友

小中大

有谁用过angiotensin 2，如何配置的？

fsdd817[使用道具]
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发表于 2011-12-10 14:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

一直在养海绵体平滑肌细胞，但是成纤维细胞长得太快了，像杂草一样。几次作了α-actin和vimentin鉴定，只见成纤维细胞占70～80％，原代的平滑肌细胞还占40～50％，一传代就不行了，巨烦。消化法和组织块法都试过，还是不行啊。
一些参考书上说成纤维细胞没有肌动蛋白，但也有这么说的：
“成纤维细胞可转化为具有特征性结构（α－平滑肌动蛋白）的肌成纤维细胞，具有收缩特性，与瘢痕形成、挛缩有关……”。
皮肤科及眼科常有一些抑制瘢痕形成的方法，还有抗肝纤维化的方法，想到有没有什么东西可以添加进培养基，比如激素，苦参碱什么的，来抑制成纤维细胞。
想听听各位的意见和建议，请指教

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发表于 2011-12-10 14:06 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我在养儿童血管瘤内皮细胞两次都失败了现在进行第三次结果如何不知

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-10 14:07 资料个人空间短消息加为好友

小中大

我有个问题想向各位高手请教，请各位不吝赐教：
看了上面的全部贴子，大家都没有谈到在养大鼠主动脉平滑肌时分离平滑肌的问题，我想问两个问题，看各位是怎么处理的：
1、取血管时是不是只取胸主动脉？我怎么每次总感觉标本很少？大家一般都取哪一段呢？
2、分离外膜和中膜时总是我最头疼的事，很小的一块长长的组织，放在培养皿内，如何能从上面顺利地把中膜取下来呢？我看文献上都有能取下中膜还是一整块的，我怎么好不容易扒下来，也只能是一小块一小块的碎块呢？根本没法用刀去切，只能放在培养液里用剪刀剪碎了。
请各位大侠说说经验，多谢！

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