细胞世界

我们培养的也是大鼠胸主动脉内皮细胞。但是最近半年出了一些问题，细胞在玻璃瓶里长的不是很好，必须在塑料瓶里养，而且还要铺一些辅助成分。原先不是这么糟糕的。我想请问高手怎么解决这个问题？希望得到大家的指导。

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您做的是原代培养吗？我上周用兔子主动脉行内皮细胞原代培养，采用的是酶消化法，将兔主动脉翻转，两头结扎，于小瓶中用加0.25%的胰酶置37度水浴中消化10分钟后加入含20%胎牛血清的DMEM，离心10分钟，弃上清，加上述培养液后孵箱培养，可消化下来的细胞很少，48小时了也不贴壁，您能否就我的操作过程予以指正，多谢！

一直在养海绵体平滑肌细胞，但是成纤维细胞长得太快了，像杂草一样。几次作了α-actin和vimentin鉴定，只见成纤维细胞占70～80％，原代的平滑肌细胞还占40～50％，一传代就不行了，巨烦。消化法和组织块法都试过，还是不行啊。
一些参考书上说成纤维细胞没有肌动蛋白，但也有这么说的：
“成纤维细胞可转化为具有特征性结构（α－平滑肌动蛋白）的肌成纤维细胞，具有收缩特性，与瘢痕形成、挛缩有关……”。
皮肤科及眼科常有一些抑制瘢痕形成的方法，还有抗肝纤维化的方法，想到有没有什么东西可以添加进培养基，比如激素，苦参碱什么的，来抑制成纤维细胞。
想听听各位的意见和建议，请指教

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终于找到一个同路人了
我也在养海绵体平滑肌细胞，虽然还没鉴定，但感觉成纤维细胞很多，因为细胞长得很快，3天左右就要传代
即往文献报导培养的海绵体平滑肌细胞纯度很高，我就觉得怀疑
很不幸昨天发现了一篇文章，这是今年3月份欧洲泌尿科学会年会上的一篇文章，这篇文章已经发表在了2005年5月份出版的欧洲泌尿科杂志上，文章摘要大意如下：
“即往报导培养的海绵体平滑肌细胞纯度很高，但作者未能重复出文献报导的结果。作者用123种不同的方法，包括磁性细胞分离技术(MACS)，对来自56名病人的阴茎海绵体平滑肌细胞进行了培养纯化，结果发现，对内皮细胞纯度可以达到98%左右，但对海绵体平滑肌细胞，普通的植块培养法纯度仅为不足5%，用某种酶处理后可以达到25%，最终用MACS技术也只能达到50%的纯度，其余均为成纤维细胞。”
看了这篇文章，真是欲哭无泪，按这篇文章的说法，海绵体平滑肌细胞根本是纯化不了的，那还做什么啊？
文章附后，不知高人有什么意见？

《 TION FOR BASIC RESEARCH AND TISSUE ENGINEERING》

我有个问题想向各位高手请教，请各位不吝赐教：
看了上面的全部贴子，大家都没有谈到在养大鼠主动脉平滑肌时分离平滑肌的问题，我想问两个问题，看各位是怎么处理的：
1、取血管时是不是只取胸主动脉？我怎么每次总感觉标本很少？大家一般都取哪一段呢？
2、分离外膜和中膜时总是我最头疼的事，很小的一块长长的组织，放在培养皿内，如何能从上面顺利地把中膜取下来呢？我看文献上都有能取下中膜还是一整块的，我怎么好不容易扒下来，也只能是一小块一小块的碎块呢？根本没法用刀去切，只能放在培养液里用剪刀剪碎了。
请各位大侠说说经验，多谢！

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我养的是大鼠胸主动脉的内皮细胞，都是取主动脉弓到肾动脉分叉的地方。可以用刀切的，买几个吉列的刮胡刀片，用时高压消一下就ok了，切动脉贼好用。个人的一点体会，希望对你能有所帮助。

很可能严重污染了！没在显微镜下看看吗？