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标题:[求助]单个核细胞分离出现很多小颗粒

loli[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
是血小板，洗涤的时候调整速度血小板就会少很多。我第一次洗涤速度1500，8分钟。第二次洗涤速度1200转，8分钟，就好很多。请问大家培养的时候有没有加刺激因子？我的单个核细胞培养的第二天就会有条状的细胞出现，在400倍下看好像有点在动。不知道大家有没有碰到这样的情况。请问楼主的是在多少倍下看的。
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greenbee[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也有碰到楼上说得条状的东西，是会动的，但从大小上看，我觉的不像是细胞，感觉还是应该是血小板，不知道大家认为是什么
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发表于 2011-12-15 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #11 loli 的帖子

这张图片是在400倍下看的。洗涤的速度是1500转，10分钟，两次都一样。下次我也调整一下速度试试。我们最终目的要分离CD34＋，曾分离了好几次并培养，但都在当时就能发现条状、黑色的东西在蠕动，而且培养过程中会慢慢增多，老师说可能是黑胶虫，很难预防。不知道你说的是不是这种情况。
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发表于 2011-12-15 15:08 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

楼主你有"黑胶虫"的照片吗,可不可以传上来我们看看
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发表于 2011-12-15 15:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

分离出PBMC后确实有时视野很不清楚，可以多洗涤两次去除血小板。但个人觉得离心次数太多对细胞也会有些影响。还会出现一些片状或者月牙状的细胞，培养后逐渐有增多。那是不是细胞碎片或者凋亡的细胞？
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一叶[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
条状、会动的？不应该是血小板。
楼主照片中的应该是血小板，低速洗两遍是会除去大部分的。1500rpm,5分钟，不过还要根据你的离心机而定。
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发表于 2011-12-15 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #15 分子式 的帖子

据老师说，黑胶虫的一个主要来源是血清，培养过程中和细胞共生，当细胞状态很好的时候，可以抑制黑胶虫；听说目前世界上还没有找到太好的方法来预防黑胶虫污染。
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moonlight45[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #17 一叶 的帖子

条状、会动的很小，约相当于单个核细胞十到二十分之一，在光镜呈黑色的，400倍下可以看到它们蠕动，可能是黑胶虫。
我们洗涤的速度是2000rpm，460g；2次。以后可能要下调一点速度。
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中国特色[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

温度高的时候，我的单个核细胞就分离的不太好。不知道是不是温度的缘故，大家有这种情况吗
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HP007[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我看到的条状会动的东西是发亮的并不是楼上各位看到的是黑色的，而且根据我问的一个师兄他们感染黑胶虫后，细胞都死掉了，不会说是两者共存的样子，不知道这个到底是什么。
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