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标题:[求助]大鼠乳鼠心肌细胞培养

生物迷[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:47 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养的心肌细胞大致分为：1、细胞悬浮期：细胞接种后至孵育23h，培养的细胞由圆形变为非圆形，并沉淀贴壁。2、贴壁期：细胞孵育24h至96h，活细胞贴住瓶壁。3、指数增生期：细胞孵育从96h开始为指数增生期。4、维持期：从第8天起进入维持期。一般对指数增生期的细胞进行处理。所以第4天可以分组处理。你可以做一下预实验，看是否有结果。
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铜雀[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:48 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问大家做原代的时候，一般差速贴壁几次？什么时候开始？
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雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我做是差速贴壁1.5小时，摸索出来觉得挺好。文献报道不一，有的差速一次，这种比较多见：于培养开始第45分钟一次；还有第1小时一次；第2小时一次的；还有的差速两次：第1个45分钟，第2个45分钟：或间隔1小时。
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发表于 2011-12-15 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

请问贴壁太多次,会不会损失细胞?还有如果看不见细胞搏动是不是就说明培养出来的不是心肌细胞?
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雪山飞鹿[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我觉得贴壁多次会损失细胞，因为部分心肌会贴壁的，会差速时损失掉，但是这样可能心肌会比较纯。心肌在以后会贴壁，搏动，这也是和成纤维细胞的根本差别。刚开始可以先等几天观察，3，4天一般会跳动的很好了。
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发表于 2011-12-15 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
昨天刚做了次，心肌原代培养，感觉出现蛋清样黏稠物质，就说明消化过度了
还有在剪碎心肌时，不要剪的太小，组织块要均匀
心肌细胞培养的关键就在与消化。
还有想问问大家，一只乳鼠最多可以得到多少细胞？
谢谢了
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guagua[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

培养的心肌细胞大致分为：1、细胞悬浮期：细胞接种后至孵育23h，培养的细胞由圆形变为非圆形，并沉淀贴壁。2、贴壁期：细胞孵育24h至96h，活细胞贴住瓶壁。3、指数增生期：细胞孵育从96h开始为指数增生期。4、维持期：从第8天起进入维持期。一般对指数增生期的细胞进行处理。所以第4天可以分组处理。你可以做一下预实验，看是否有结果。

你好！我对于你的说法有个疑问，请指教！心肌细胞没有分裂增生的能力，怎么会有指数增生期呢？
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生物迷[使用道具]
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发表于 2011-12-15 15:53 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你好！我对于你的说法有个疑问，请指教！心肌细胞没有分裂增生的能力，怎么会有指数增生期呢？

==============================================================================================================

我们认为整体动物心肌细胞的增值能力在出生后是能保持一个短时期。例如大白鼠在出生三周后其DNA合成所需的酶的活性及细胞增值能力就明显地降低至成年鼠的最低水平。此后，收缩蛋白大量z增加，细胞增大，对某些增大心脏的刺激，仅引起心肌肥大（细胞大小增加）而没有增值（细胞数增加），生后1-10天的乳鼠心脏均可采用，但以2-4天的最好，此时心肌细胞已充分分化，适于做各种研究，而出生4天以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的细胞。
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utt0989[使用道具]
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发表于 2011-12-15 16:00 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们认为整体动物心肌细胞的增值能力在出生后是能保持一个短时期。例如大白鼠在出生三周后其DNA合成所需的酶的活性及细胞增值能力就明显地降低至成年鼠的最低水平。此后，收缩蛋白大量z增加，细胞增大，对某些增大心脏的刺激，仅引起心肌肥大（细胞大小增加）而没有增值（细胞数增加），生后1-10天的乳鼠心脏均可采用，但以2-4天的最好，此时心肌细胞已充分分化，适于做各种研究，而出生4天以后的乳鼠心脏中分离出来的心肌细胞较慢发育成为有自律性搏动的细胞。

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你好！我也养了几个月的细胞了，我取三天之内大鼠心脏培养，未见心肌细胞增殖啊。我也没有具体的镜下计数细胞的量，但是之间细胞体积增大未发现数量增多。谢谢！
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zhezhe[使用道具]
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发表于 2011-12-15 16:01 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
等到第五天,我还是见不到细胞搏动,郁闷呀!
问题到底出在哪里呀???
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