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标题:[求助]大鼠乳鼠心肌细胞培养

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回复 #30 zhezhe 的帖子

把你的做的过程详细的说说,说不定大家就能指出你的问题所在。
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我最近又养了次心肌细胞,细胞是搏动了,但是却发现心肌细胞约有2/3发黑,我看了我们实验室里别人养的细胞,却没有这个现象,都比较亮。我的操作应该没有问题,唯一的可能就是我取上清时是培养基终止液:上清=1:1。不过文献报道时也是这样啊?
不知大家有碰到这种情况么?该怎么解决啊?希望给予帮助,现在正在苦恼中............
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回复 #32 雪山飞鹿 的帖子

你所说的细胞发黑具体是指什么,是细胞外面和细胞间有类似黑色的块状物质,还是细胞胞浆发黑。前者的话我也碰到过,个人感觉是是细胞碎片,但这种细胞碎片在换液的时候很不好去除,并且在细胞搏动成团的地方聚集的很多,有时甚至会遮盖心肌细胞,影响观察视野。后来试着在消化时将所收集到的细胞悬液暂时放于4度冰箱中,而不是一直放在超净台中,并且在将细胞悬液离心的次数改为两次,以期减少碎片类物质。情况会好些。
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回复 #33 生物迷 的帖子

我说的细胞发黑是细胞外面粘附一圈黑色物质,细胞之间也有黑色的小絮状团块,细胞胞浆倒没有明显的发黑。细胞绝对没有污染,因为成纤维长的很好。我照你教的方法再做。
不过就是有点搞不懂我做的为什么会这样。同实验室的人做的就没有出现这样的情况。
另外,为了解决这个问题,在操作过程中还需要注意什么吗?
再次感谢!
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回复 #34 生物迷 的帖子

对于这个问题我有时也很头痛,有时候也找不到原因。做三五次就会出现一次这种情况,个人分析:1、这些黑色的物质团块可能是一些活性差的细胞死亡后的碎片,在消化的过程中磁力搅拌的速度是不是有点快造成心肌细胞的损伤导致其活力差而出现,可以试着使搅拌子的速度减慢些。2、由于是用铁制的大头针做的磁力搅拌子,在高压后烤干后有时甚至会生锈,这样在消化的时候大头针就会与消化液和细胞直接接触,是否会对细胞产生影响。可以买最小规格的磁力搅拌子规格不到一厘米的。或者将大头针放在细玻璃管中,用酒精灯将烧灼试管的两端将其封闭,这样大头针就不会直接与消化液接触了。对次问题自己还是不能肯定原因,。期望其他有经验的群友能帮助你。
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回复 #35 生物迷 的帖子

不知怎么说感谢啦!你的分析已经够透彻了!
那我以后操作轻柔一点,再看效果,可能是有点粗暴操作了吧!
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我给细胞拍了照片,你帮着给看看吧,细胞密度有点大,是六孔板,平均约2只心脏一个孔。心肌搏动很好,每分钟100次以上。就是有点黑,不知道这对细胞因子表达有影响没有?


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有两个图片先参考一下,这两个图片来自 建立细胞污染专区,
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=516319&sty=2')
cuturl('http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=66&id=516320&sty=2&age=0&tpg=1&ppg=8#516320')
你看一下是不是类似。
我的细胞也遇到过这种情况,你的细胞存在这种情况几天了,黑色的物质有没有增多。个人怀疑还是污染了,但也不能定,。看一下其他群友的意见。
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第一个图片


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