细胞世界

想问问楼主：“只要按照顺序一片片地吹打，很容易就能够把该细胞吹打下来。”

这个是什么意思呢？我昨天刚刚用胰酶消化了细胞。可是不怎么好。看到楼主这个，有点想试用下下。但是不明白“顺序”是什么意思呢

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就像你扫地一样，从上向下，从瓶口到瓶底。

兄弟，我用你的好细胞摸索出了新的消化传代方法，很好用，用0.1%的edta消化，好使。等我忙完这阵子，来北京会你致谢

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哦。我找个时间试一下。。。但是EDTA对细胞是用很大的损伤作用的，血清也不能终止他的消化作用，所以必须要离心洗干净才可以，否则细胞会越来越差啊。。

我们实验室也在养这种细胞，把自己的经验与大家分享一下，由于细胞来源可能不一样，所以方法只供参考。

由于细胞是从生物物理所引进的，所以培养方法沿用物理所的。

细胞用10％ FCS＋DMEM培养，细胞的形态应该是又圆又亮，要是长了触角，可能就说明已经分化了，不建议继续培养。大家可以参见ATCC的网站。

我们发现直接用培养基不能吹下细胞。由于细胞贴壁很牢，可以先去除培养基，再用生理盐水洗一遍，弃掉，再加入适量的生理盐水，轻轻把细胞吹下来。离心后用培养基重悬后，按比例传代。这样细胞很容易就能下来。

一般1：10传，细胞2-3天长满一皿（常规用培养皿培养便于吹吸细胞）。

不建议用胰酶消化，因为容易使巨噬细胞分化（物理所传授没有试验过）。

用的培养基一定要用不含内毒素的去离子水配制。避免细胞分化。我们现在用hyclone配制好的DMEM还可以，有条件的最好自己配制，现在的假冒培养基特别多。

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我想要请问一下，这样消化传代不会影响这个细胞的分泌或者是其他的生物活性吗？有什么依据吗？谢谢

哦。我找个时间试一下。。。但是EDTA对细胞是用很大的损伤作用的，血清也不能终止他的消化作用，所以必须要离心洗干净才可以，否则细胞会越来越差啊。。

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如果是成瓶买来的胰酶，是需要买含有EDTA的还是不含的呢？我也需要马上使用这个细胞来进行试验了，很像多知道一些你们的经验，这样可以少走一些弯路，谢谢你的帖子和大家的分享了，受用了~~~

RAW 264.7细胞可以作为很多基础医学领域和药理学领域的研究模型，由于每个人的研究方向不同，所以细胞培养方式也有差别。

这个细胞属于单核/巨噬细胞，会在各种刺激下分化，成巨噬细胞样。因此在传代过程中要尽量避免各种刺激。所以经典的培养方法中推荐用热灭活血清，传代用细胞刮刀轻轻刮下，而不用胰蛋白酶消化。

如果反复刺激RAW 264.7细胞，在某些实验中，细胞的造模成功率会降低。比如在LPS诱导后Griess试剂法测定亚硝酸盐以考察细胞分泌一氧化氮，可能会失败。
另外，1640培养基中含有的硝酸盐很多，如果做硝酸还原酶偶联Griess试剂法检测总一氧化氮分泌量，培养基中的硝酸盐会被还原成亚硝酸盐，导致实验结果不准确。而且一般在Griess试剂法测定亚硝酸盐的实验中，要用无酚红培养基。

所以做炎症相关研究的同道尽量不要采用楼主推荐的方法，可能会走很多弯路。

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您好，我准备要使用RAW264.7细胞来做一些炎症因子的检测，荧光定量PCR检测一些基因的表达，还有信号通路，我想要向您请教一下关于这个细胞的培养问题，不知道是不是可以加您呢？

所以要做上面的这些实验，请问培养基要使用什么呢？看到您说要使用不含酚红的培养基？有这样的吗? 是使用含有高糖的？需要谷氨酰胺吗？

消化这个细胞需要使用胰酶吗？看到有人推荐生理盐水？ 还是使用传统的胰酶+EDTA的呢?

焦急等待您的回复，谢谢~~~~~