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标题:[讨论帖]巨噬细胞RAW264.7的经验总结

铜雀[使用道具]
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这个细胞很好养的,胰酶消化很方便,1640和dmem都能养,是我目前培养过的最好养的细胞
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气泡[使用道具]
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我们实验室也在养这种细胞,把自己的经验与大家分享一下,由于细胞来源可能不一样,所以方法只供参考。

由于细胞是从生物物理所引进的,所以培养方法沿用物理所的。

细胞用10% FCS+DMEM培养,细胞的形态应该是又圆又亮,要是长了触角,可能就说明已经分化了,不建议继续培养。大家可以参见ATCC的网站。

我们发现直接用培养基不能吹下细胞。由于细胞贴壁很牢,可以先去除培养基,再用生理盐水洗一遍,弃掉,再加入适量的生理盐水,轻轻把细胞吹下来。离心后用培养基重悬后,按比例传代。这样细胞很容易就能下来。

一般1:10传,细胞2-3天长满一皿(常规用培养皿培养便于吹吸细胞)。

不建议用胰酶消化,因为容易使巨噬细胞分化(物理所传授没有试验过)。

用的培养基一定要用不含内毒素的去离子水配制。避免细胞分化。我们现在用hyclone配制好的DMEM还可以,有条件的最好自己配制,现在的假冒培养基特别多。
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loli[使用道具]
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不用胰酶消化是RAW对胰酶消化有抵抗吧?
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RAW 264.7细胞可以作为很多基础医学领域和药理学领域的研究模型,由于每个人的研究方向不同,所以细胞培养方式也有差别。

这个细胞属于单核/巨噬细胞,会在各种刺激下分化,成巨噬细胞样。因此在传代过程中要尽量避免各种刺激。所以经典的培养方法中推荐用热灭活血清,传代用细胞刮刀轻轻刮下,而不用胰蛋白酶消化。

如果反复刺激RAW 264.7细胞,在某些实验中,细胞的造模成功率会降低。比如在LPS诱导后Griess试剂法测定亚硝酸盐以考察细胞分泌一氧化氮,可能会失败。
另外,1640培养基中含有的硝酸盐很多,如果做硝酸还原酶偶联Griess试剂法检测总一氧化氮分泌量,培养基中的硝酸盐会被还原成亚硝酸盐,导致实验结果不准确。而且一般在Griess试剂法测定亚硝酸盐的实验中,要用无酚红培养基。

所以做炎症相关研究的同道尽量不要采用楼主推荐的方法,可能会走很多弯路。
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zwsyrt[使用道具]
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成片生长是因为传代的时候太稀了。传代密度稍微高一点就很均匀。

一般100mm dish 1:4 OR 1:5传代比较合适。

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巨噬细胞的本性就是小片扎堆生长,与密度的稀浓无关。巨噬细胞有细胞间信使系统互相调节的。
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ATCC上该细胞类型确实是用1640培养的,但我用GIBCO 的DMEM它也长得很好。

呵呵,胰酶消化也是可以的,0.125%,37度4分钟就OK了
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zwsyrt[使用道具]
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回复 #17 969 的帖子

同意,呵呵。其实培养液很多细胞都是可以共用的,但是,实验结果确实不一样的。因为细胞的生长状况不一样了,所以,还是要按照标准的培养液走。
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whitesheep[使用道具]
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我也在养这种细胞,可是养的一直都不好。我用DMEM+10FBS,每次传代都用胰酶消化,很难消化,几乎每次都是用滴管刮下来的,传几代后细胞就变形了,有变长条形的,有伸出很多伪足的,给为看看我的培养方法有没有要更正的呀?
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zwsyrt[使用道具]
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回复 #19 whitesheep 的帖子

这个细胞我一直养的很好养的啊。我就是按照我所写的方法养的,你可以仔细看一看。
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ffooll[使用道具]
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我想问一下在做实验中巨噬细胞RAW264.7和使用从血液中单核细胞分化而来的巨噬细胞有何不同?
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