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标题:[讨论帖]巨噬细胞RAW264.7的经验总结

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发表于 2011-12-15 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室经常使用胰酶（0.25%）消化加冷激（4度8min.后转入负20度冷激1.5min),胰酶消化在37度温箱内10min。细胞状态稳定，老化现象少发，不妨一试！！
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:09 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
这个细胞养了快三年了，我用这细胞做两个药物的协同抗炎作用，差点把我折磨死，感觉很不稳定，重复性较低。还好这个细胞很好养，就是不大好用！

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严重同意！！！呵呵！我也快被折磨死了。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室也在养这种细胞，把自己的经验与大家分享一下，由于细胞来源可能不一样，所以方法只供参考。

由于细胞是从生物物理所引进的，所以培养方法沿用物理所的。

细胞用10％ FCS＋DMEM培养，细胞的形态应该是又圆又亮，要是长了触角，可能就说明已经分化了，不建议继续培养。大家可以参见ATCC的网站。

我们发现直接用培养基不能吹下细胞。由于细胞贴壁很牢，可以先去除培养基，再用生理盐水洗一遍，弃掉，再加入适量的生理盐水，轻轻把细胞吹下来。离心后用培养基重悬后，按比例传代。这样细胞很容易就能下来。

一般1：10传，细胞2-3天长满一皿（常规用培养皿培养便于吹吸细胞）。

不建议用胰酶消化，因为容易使巨噬细胞分化（物理所传授没有试验过）。

用的培养基一定要用不含内毒素的去离子水配制。避免细胞分化。我们现在用hyclone配制好的DMEM还可以，有条件的最好自己配制，现在的假冒培养基特别多。

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ATCC的照片长了好多脚啊，而且传代是1：3-1：6

他们推荐的是细胞刮刀，不知什么原因
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阿敏[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们这里有人就是用细胞刮刀刮得，可是她的往往传了几代之后，细胞就很容易变形分化了，变形得很夸张。而我用胰酶消化，就好一些。虽然也有分化的情况，但分化得没有那么夸张。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:10 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
最近发现一个比较奇怪的现象

用培养皿或培养板时，细胞几乎都是圆的，长触角的很少

而用培养瓶时，第二天触角就长出好多来

大家可以试试
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tianmei001[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我想做264.7和C57小鼠提取的原代淋巴一起培养，但是不知道细胞系和原代提取的能不能放到一起培养。请问各位大侠有没有做过类似的或者知道的指点一下。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #36 windy+++ 的帖子

长触角也是其正常的生长形态。
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windy+++[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #38 zwsyrt 的帖子

问题是圆形细胞会由70% 减少到30%
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jujuba[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
大家好，我也在养这种细胞，我事先没有查阅过资料，直接从同学那要来，按照她的方法养的。

我是用5%的小牛血清加1640养，隔天换液，胰酶消化，弯管吹打。

感觉和大家说的有些不一样，我们是要让它变成泡沫细胞。

细胞很多都不是圆圆的，有少部分圆圆的同学说是泡沫细胞，而且她还说用10%的培液养会很容易都泡沫化···

向大家请教一下···

补充一下，细胞的形状大部分都是是长梭形，长长的椭圆形，同学说刚买回来的时候就是这种样子，是正常形态。
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小鱼鱼[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:12 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我也养这种细胞半年了，感觉还是比较好养的，培养基DMEM+10%FBS，我一般两天传代，三天要冻存，长的很快，消化时用吸管吹打可以，胰酶消化也行，复苏时细胞状态没什么特别的差别。
可是我现在用它做细胞转染，怎么都不成功，向各位大虾请教，我现在很郁闷呀，谢谢。
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