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标题:[讨论帖]巨噬细胞RAW264.7的经验总结

greenbee[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

各位战友，我也开始头疼这个问题了。照给我细胞的那个实验室的方法，我养出来的就是长触角的，真是郁闷了。我DMEM+10%FBS, 去培养基后+PBS冲洗，刮刀刮，700rpm离心后接种。

我真郁闷啊！！！！！
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greenbee[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:23 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在细胞的状态跟ATCC官方给的那个高密度的状态差不多了，楼主还有各位战友，你们看能不能做炎症模型呢？急啊！
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jrwyyplt[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们这边消化是用冷的含0.05%EDTA的PBS，消化2分钟左右，很容易消化下来，状态也很稳定，只是传代时吹打力度要轻柔，机械力也会对细胞产生影响，导致触角。
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黄花菜[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:24 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
现在很迷茫了，到底是刮刀好，还是消化好？
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在样RAW细胞，感觉这个细胞相对还是比较容易养，我也是用的10%胎牛血清+DMEM培养基，刚开始养的时候，细胞的确像楼主所说的那样，圆圆的堆在一起，中间可以看到少量张牙舞爪的细胞，传代的时候用胰酶消化，两三代以后，张牙舞爪的细胞慢慢就变多了，而且细胞里面出现了不少颗粒，感觉还是细胞状态不是那么好了，的确可能想前面的战友提到的那样，胰酶可能对细胞有影响，导致细胞出现了分化。今天我试了一下楼主的方法，直接加2-3ml培养基，我用的巴氏管，斜着进行吹打，细胞还是很容易就下来了，个人认为不用胰酶消化应该是可行的，至于这样分下来的细胞生长怎么样，好需要等两天看。我会及时报告给大家。
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发表于 2011-12-15 17:25 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

好成活是好成活，就是要养成圆圆亮亮的得下功夫，至少我现在在进行“苦难的行军”
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发表于 2011-12-15 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我的RAW264.7消化两个小时都不会掉下来，现在我都加三毫升胰酶消化15-20min,然后直接用那三毫升胰酶来吹打细胞，就算这样还是很难吹
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hot_hot_hot[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在在用LPS诱导RAW264.7测定NO，正常培养的时候培养基用DMEM，铺板的时候用无酚红的1640，请问这样影响会很大不？主要是我们只有1640是无酚红的，听说1640里的亚硝酸盐很多，不适于用来做这个实验是吗？
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发表于 2011-12-15 17:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
各位战友，我也开始头疼这个问题了。照给我细胞的那个实验室的方法，我养出来的就是长触角的，真是郁闷了。我DMEM+10%FBS, 去培养基后+PBS冲洗，刮刀刮，700rpm离心后接种。

我真郁闷啊！！！！！

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你可以试试我的方法啊。。。
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zwsyrt[使用道具]
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发表于 2011-12-15 17:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我现在细胞的状态跟ATCC官方给的那个高密度的状态差不多了，楼主还有各位战友，你们看能不能做炎症模型呢？急啊！！！！

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我看可以了，你可以试着做一下预试先。
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