小中大
我在养这个细胞,时间不长,才半个月吧,把前面几位的方法都实验了一下,体会如下:
这个细胞生长快,条件好时24h内能分裂两次至少。而且喜欢扎堆,所以2天就要传代,不是真的空间不够,而是细胞都挤在一起。所以,如果瓶子里细胞密度小,培养基2天还是很好,可是细胞却扎堆,需要传了,这样培养基就浪费了,我觉得应该保持瓶中的细胞密度在20~40%左右,分裂2~3次就传代,这时刚好培养基发黄。细胞太少就浪费培养基了。
这个细胞是巨噬细胞,就是M0,未分化的巨噬细胞,外观是圆形高折光,贴壁非常快,10min内能贴80%,也容易脱落,无胰酶拍打200下或者胰酶室温30s轻轻拍打都能下来60~80%,不过无胰酶吹打是吹不下来的。
如果培养条件不好,它会分化,变成多边形,从高折光的小圆亮点变成灰色的一小片,变得粘附非常紧,所以我觉得应该控制消化时间和拍打力度,不要过分追求把所有细胞都弄下来,这样一来影响状态好的未分化圆形细胞活力,另一方面会把状态不好的分化细胞弄下来,不如缩短胰酶时间到1min内,把分化过的高粘附细胞留在瓶里,正好起到对细胞分化状态的选择作用。
我传代时首先无胰酶拍打,能弄下来约50%的细胞,然后加胰酶拍打30s,镜下观察,一般30s刚刚好,剩下未脱落的都是分化的形态不好的细胞,这种细胞继续培养,如果要回到圆形,可以用胰酶消化后传代。