细胞世界

离出的第二天就伸展开了么？我分离的细胞第二天还是类似于圆形的呀，难道不是HSC？！（ps实验室的倒置显微镜不能激发荧光了，还有什么可行的方法能在分离后就先判别下么）

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您好

如果想从形态判断的话. 肝细胞最好鉴别, 比其他细胞大很多(2-3倍) fibro和HSC长的差不多. 理论上只能通过desmin免疫染色或自发荧光去鉴别.(但是倒置镜下看多了, 也能鉴别出来的, 折光率不同, HSC由于富含脂滴所以更加凹凸不平以及包浆内有小颗粒)

HSC一般在24小时以内会贴壁. 所以第二天换液后就能看到细胞开始展开.

但收集以后经常不贴壁，有贴壁的，形态也不好，总是圆圆的，铺展不开，真是急死了

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您好

刚分离后试一试用trypan blue 看看细胞的viability. 如果死细胞多的话, 当然不会贴壁的

每次分离的细胞又用不完，冻存后状态又不好········

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您好

太羡慕您了. 我是每次为细胞不够而发愁.

不知楼主用的Optiprep是什么公司的？

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OptiPrepTM（货号：1114542 ） Axis-shield（公司） 奇康有代理，我自己用过，的确不错。

请问楼主用的DMEM是否含丙酮酸？
做药理实验用传代的HSC与原代的相比，差距大吗？

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原代星形细胞在培养5-7d后会早期活化，14d完全活化，后者与传代的星状细胞在细胞表型和形态上无明显差异

楼主的照片很漂亮，最近也在分小鼠的HSC，用9%的nycodenz，有细胞层，但收集以后经常不贴壁，有贴壁的，形态也不好，总是圆圆的，铺展不开，真是急死了

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说明细胞的活力不好，应该从提高细胞活力的细节着手，比如细胞离体后尽量缩短处理时间，一般两个小时可以完成。在离体后尽量保持4摄氏度的细胞环境。还有就是不要过度消化，链酶对星状细胞也有损伤。
分离的星状细胞3h即可良好贴壁，2d大部分细胞开始伸展，其实根据我的观察，如果你细胞活力好第24h细胞就会开始不规则。个人经验，仅供参考。

您好

如果想从形态判断的话. 肝细胞最好鉴别, 比其他细胞大很多(2-3倍) fibro和HSC长的差不多. 理论上只能通过desmin免疫染色或自发荧光去鉴别.(但是倒置镜下看多了, 也能鉴别出来的, 折光率不同, HSC由于富含脂滴所以更加凹凸不平以及包浆内有小颗粒)

HSC一般在24小时以内会贴壁. 所以第二天换液后就能看到细胞开始展开.

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补充几句，星状细胞的早期纯度鉴定只能通过自发荧光和油红o染色。细胞早期desim表达不强，甚至不表达，因此不是早期鉴定的指标。我最近正在做油红o爬片染色，有经验的可以交流一下。