细胞世界

不知楼主用的Optiprep是什么公司的？

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我用的是sigma的

cuturl('http://www.sigmaaldrich.com/catalog/ProductDetail.do?D7=0&N5=Product%20No.%7CBRAND_KEY&N4=D1556%7CSIGMA&N25=0&QS=ON&F=SPEC')

请问楼主用的DMEM是否含丙酮酸？
做药理实验用传代的HSC与原代的相比，差距大吗？

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这个差距指的是什么?

补充几句，星状细胞的早期纯度鉴定只能通过自发荧光和油红o染色。细胞早期desim表达不强，甚至不表达，因此不是早期鉴定的指标。我最近正在做油红o爬片染色，有经验的可以交流一下。

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HSCs是desmin-positive的.
下面附上我自己做的desmin的免疫荧光图,仅供參考.

针头可以磨平了 再用
我觉得关键还是缩短操作时间

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?

想跟版主探讨几个问题。
1、是否有必要使用15%opti prep？ 我觉得理论上，只用11.5%opti prep 加GBSS就可以了。因为我们只收集11.5%opti prep 和GBSS之间的细胞富集区。楼主认为呢？
2、梯度离心时，使用50ml离心管和15ml离心管的问题。两个我都用过，都能看到明显细胞层，小管子相对较厚些。如果只拿细胞层，小管子看的更清楚，再考虑到管壁对细胞的吸附，是不是小管子得率上更有优势？
3、我每次把BGSS和11.5%opti prep 全都收集起来，而不是只收集两者之间的细胞层，这样做是不是会影响纯度？楼主是怎么操作的？
谢谢赐教！

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赐教不敢当, 一起学习吧

1. 如果仅仅是2层,11.5%和GBSS的话,将使很多细胞拥挤在下面11.5%那一层. 这样的弊端就是很有可能其他细胞也有可能漂上来. 如果是3层的话,等于有2次"把关"对于提高纯度有帮助.
2. 没有比较过,不清楚,但是这个地方应该影响不大的.
3. 11.5%那层有很多fibroblast和endothelial, kupffer等等其他细胞, 一不小心就会吸上来, 这样非常影响纯度的.

问4.OPTIPREP配置有哪些需要注意的事项？

答: 需要注意的地方有几点
1. 尽量现配现用
2. 虽然我的配方是15%和11.5% 但是实际上我会下面的稍微重一下, 上面的稍微轻
一下, 这样对提高纯度有一些帮助 (或许是心理作用?)

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问题一：看过有些文献是用DMEM高糖培养液来稀释，很多文献都直接写配置成百分之多少的，没有提到稀释液，想问下楼主，你也是用这个稀释的吗
问题二：optiprep稀释后密度的计算，有没什么计算公式的

上网下载一个optiprep的说明书，就什么都有了。