细胞世界

你的MTT重新配制试试。MTT要用生理盐水配，不要用培养基配。
另外，MTT反应4小时后，显微镜下观察一下原来细胞的地方应该形成了网状的黑色颗粒。

倒着回答你的问题
3、是可以的，而且这样数据更准，只是xinku你了。而且强烈建议你参照我在上面贴子中介绍的先做个扫描，得到最高峰的那个波长，然后在此波长下测OD，值可能会高好多。
2、建议你在加DMSO前用生理盐水洗涤2遍，注意不要把细胞洗涤下来。
1、加MTT反应4小时后，镜下应该很清晰的网状黑色颗粒，细胞形态是看不到的，但你的呈模糊状，可能原因之一是你的药物是否影响MTT与细胞线粒体间的反应，因此按2洗涤后看一下，原因之二可能是0.1MPBS配制的MTT液不等渗，会否影响细胞与MTT间的正常反应，因此还是建议你用等渗的生理盐水配制。

凡是与细胞接触的液体尽可能考虑等渗、pH中性等。
上面分析的两个原因并不一定对，遇到问题总得找点理由吧，仅供参考，希望不是误人子弟。