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标题:[求助]关于ＭＴＴ测药物半抑制率的困惑

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发表于 2011-12-16 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
to +小生怕怕+

是否你的药物在低浓度时确实有促进细胞增殖的功能？有时候实验结果与预期不符甚至相反不一定是坏事，可能是创新发现的曙光呢。
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发表于 2011-12-16 17:49 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。
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发表于 2011-12-16 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
CCK-8我们也在用，测出的数值很奇怪，没有细胞对照组的吸光度竟然达到0.7多，而有细胞的实验组才0.4～0.5多。既然MTT和CCK-8都是利用线粒体脱氢酶进行反应，为何没有细胞的对照组（只添加了培养液，之后添加CCK-8）还会有如此大的吸光度呢？
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发表于 2011-12-16 17:50 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。

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太谢谢你的建议了，很有可能。我下次做的时候在四周加上一圈ＰＢＳ试试！
太崇拜了，谢谢。
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发表于 2011-12-16 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
你的对照值较低，是否是因为你的对照组设置在96孔板的最边上一列？
96孔板在试验中经常会有边缘效应，就是在边上每孔的值与中间是不一致的，这可能是由于边上的培养基易于蒸发的缘故。因此设对照组时尽量避免在板的边上。

==========================================================

太谢谢你的建议了，很有可能。我下次做的时候在四周加上一圈ＰＢＳ试试！
太崇拜了，谢谢。
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发表于 2011-12-16 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

建议在四周加上一圈正常培养基
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了了[使用道具]
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发表于 2011-12-16 17:51 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我来说简单说两句
MTT的测定波长不是固定的，可以做个吸收波长扫描，一般来说是490－580，不一定非得用最大吸收峰比如上面说的570来测，因为，譬如峰形很尖的话，反而是用峰肩或次波峰的波长来测比较合适，所以490是完全可以的，也不存在用DMSO融解就非得用490来测，DMSO只是一种用来融解结晶的溶剂而已，SDS,酸性异丙醇也行。
IC50没有硬性规定，根据你的实验特点，你也可以譬如在24、48、72h都测下，然后根据OD值分别计算这三个时间点的IC50。
测生长曲线一般是36小时或48小时换液，这时当然不能加药啦，只是通过MTT法来间接发映细胞的增殖变化。
OD值一般在0.7-1.5之间合适，做MTT之前是要摸索的，目的是使得OD值与细胞数量呈线性关系。
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发表于 2011-12-16 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
看过上面的解释后,对我帮助很大.我也有个问题想问:96孔培养板孔间差异如何避免，如何尽量减少“周边效应”？我做MTT时，选择边上的孔做对照与选择中间的孔做对照OD值能差0.1，是***作上哪儿出问题了吗？请指教！
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windy+++[使用道具]
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发表于 2011-12-16 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
one你好！做药物对肿瘤细胞的敏感性实验MTT时,药物与细胞一起铺板呢?还是先选择一定细胞密度铺板,置培箱过夜使细胞贴壁后再加药？如果选择第二种方式，加药前要不要先换新的培基？
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克隆鱼[使用道具]
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发表于 2011-12-16 17:52 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

可否请大家再讨论一下,很多人都说测490下的值,但是SIGMA公司的MTT说明书上写的Spectrophotometric reading 570 nm,这个波长是不是更好一点呢?
今天扫描450-630之间,发再550这个位置的吸收什好像是最大的,处于峰值的地方.
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