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标题:[讨论帖]肾小球足细胞讨论专区

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发表于 2011-12-18 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
请问你有做过利用siRNA或者shRNA干扰足细胞中的基因吗？？
如果要做干扰，那是做33°的细胞呢，还是做37°细胞，PS假设某个基因在这两种状态时都有表达的。根据市场上最多的利用lipo2000脂质体转染。
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发表于 2011-12-18 11:06 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
北医丁洁做得多，参看前几年的文献吧!当然用分化态的细胞做罗
lipo2000脂质体转染可以，病毒载体做也可以，方便并且转染率高，但是对细胞影响大。
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发表于 2011-12-18 11:07 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
版主好，我也在养足细胞，但是总觉得细胞状态不好，33度传代后在37度培养14天后只有小部分细胞分化出圆润饱满的胞浆，大部分细胞仍然是多角形、梭形，形态不一致，看上去乱糟糟的。
我用的细胞是15－20代的，corning培养瓶、Gibco胎牛血清，不明白其中是什么环节出了问题，看到前辈发表在中华肾上的足细胞图片很漂亮，所以想请您指教下～谢谢
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发表于 2011-12-18 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
足细胞传代次数多了就不太好啦！你的是15到20代，应该不错。
第一是注意在33度培养传代时细胞密度不要太密，以80%左右为宜；
第二是33度传到37度时细胞密度不要太多；
第三，有人在37度养4到5天后再传一次，你可以试试。
在37度养10天以上就分化得挺好啦。
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发表于 2011-12-18 14:54 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我下次再试着降低一下培养的密度
请问前辈33度和37度培养时一般把细胞数量控制在什么范围？
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发表于 2011-12-18 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

另外想请问下版主在33度培养时干扰素的浓度只用10U/ml，还是由高浓度逐渐降低至10U/ml？
谢谢
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发表于 2011-12-18 14:56 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

回复 #56 nn255 的帖子

33度培养时干扰素的浓度只用10U/ml就可以啦
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发表于 2011-12-18 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正常情况下足细胞的培养基是1640，请问此1640中含有的葡萄糖浓度时多少。如要进行高糖培养。我看文献上正常葡萄糖是5mmol/L,高糖为30mmol/L，而普通的1640中含有的葡萄糖是11.1mmol/L.那此时的葡萄糖算是高糖吗？但正常情况下如用此11.1mmol/L的培养液，对足细胞的渗透压也有影响啊。难道基础情况下足细胞1640培养液中不用葡萄糖还是用另外一个浓度。h还是不考虑基础的葡萄糖，再在此基础上加5mmol/L的葡萄糖，此时即为普通葡萄糖培养，加30mmol/l的葡萄糖为高糖培养。很困惑。请教有关养过此细胞的群友啊
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发表于 2011-12-18 14:57 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

正常足细胞培养液1640中葡萄糖的浓度是多少啊？
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发表于 2011-12-18 14:59 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我也在养足细胞 有一段时间了 感觉37度的细胞密度很难控制 稀点就不怎么长 密点又增值的特别厉害
请问版主33度1:10传到37度会不会太稀了啊？37度养4天左右在传一次 那这4天算是分化时间吗？
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