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标题:[求助]请高手鉴定破骨细胞

fei1226com[使用道具]
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11
 
谢谢回复!我用400倍的染色后看细胞都没有你的大,是不是我分离的不对?
那经过造血干细胞分化为破骨细胞,需要培养多少天?需要加1.25-二羟基维生素D3吗?
我还想问问,依您的经验来看,我的是吗?
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loli[使用道具]
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回复 #11 fei1226com 的帖子

不知道你分离的是否是小鼠的破骨细胞,种属差异可能也是存在的。

个人诱导培养过破骨细胞,但是没有直接分离获得过破骨细胞,所以不敢妄下结论您获得的是否为破骨细胞。

具体的培养和鉴定方法在附上的文献内有详细的介绍。

好运!
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fei1226com[使用道具]
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回复 #12 loli 的帖子

谢谢你的回帖。我分离的是大鼠破骨细胞,大概有2-3月龄。其实应该用乳鼠的,但是我是新手,借着师哥分离心脏后的大鼠就继续做了,不知道这样差异会不会很大。具体文献也看过,国内外也没有破骨细胞的纯分离培养。只是在形态学方面想请教一下大家。
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fei1226com[使用道具]
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附上我的方法,请大家多多指点:
分离得到大鼠股骨,胫骨;刮净骨外膜及其他附着组织;于培养液中剪掉两端骨诟;用针头抽取培养液,然后冲洗骨腔;直至骨腔变白;将冲洗得到的悬液静置。吸取上层培养液于6孔培养板培养。24小时后吸取培养液以去除不贴壁悬浮细胞;更换培养液。3天后,吸取培养液80%继续培养。
2-3天时,细胞明显贴壁,且有长长的伪足出现。个别细胞还呈现空泡状,但在400倍倒置相差显微镜下看不到多核状。3天后,经瑞氏染色后,细胞多核状态不明显,上面有图。
我现在买不到薄牛骨片,无法进一步鉴定;各位大侠有相关经验,敬请赐教!
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loli[使用道具]
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"具体文献也看过,国内外也没有破骨细胞的纯分离培养。"

这方面的文献还是有的,包括中文的也有。
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fei1226com[使用道具]
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我还想问一下高手们,在冲洗骨髓腔的过程中,会不会有成纤维状的细胞?
如果培养基里面不加1,25-(OH)2维生素D3,破骨细胞是不是就分化的晚?如果染色主要见到的是单核,但有伪足的细胞,那是不是破骨细胞前体?敬请赐教
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园丁##[使用道具]
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我感觉感觉骨髓腔内的应该不是成纤维细胞
造成其他原代贴壁细胞污染的主要应该是上皮细胞
再说骨腔内应该是没有啥成纤维组织的
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北风那个吹[使用道具]
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前面3张好像焦距有问题......
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fei1226com[使用道具]
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附上最新破骨细胞多核形态瑞氏染色图片,请高手帮忙鉴定。


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fei1226com[使用道具]
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关于TRAP染色鉴定,需要购买利副品红,AS-BI磷酸盐,请问哪里能购买到?普通试剂公司都没有这种药品。请大家帮忙!
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