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标题:[求助]请高手鉴定破骨细胞

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发表于 2011-12-18 15:39 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
那张片（最后一张）是已经养11天的了，我觉得应该不会是前体了吧，因为我染过3-5天的细胞，生长状况在倒置显微镜下观察和11天的形态基本相同，数量不多，但是染色效果就不出来1月16日那样。不知这么说有没有道理？我是学食品营养的，还请大俠多多指点。这是我第一个月首次作出来的细胞阿。
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发表于 2011-12-18 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我想用自制的TRAP孵育液，可是买不到AS-BI磷酸盐。请指教
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发表于 2011-12-18 15:40 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我还想问一下，我用的是1-2个月龄的WISTER大鼠，这样行不行？没经过诱导。附上我最后一次的染色图片。


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2011-12-18 15:40
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发表于 2011-12-18 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
单核的破骨细胞都可以叫破骨细胞的前体细胞，而且前体细胞在体外培养时可以分裂，尤其是在有Ｍ－ＣＳＦ时．而且，在分裂以后的前体细胞还是前体细胞，在体外，没有sRANKL时，不会differentiation.

ＴＲＡＰ染色的原料从Sigma可以买到．
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发表于 2011-12-18 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
感谢指点！说说的我的个人想法，请指点。就图片分析来看，已经是多核细胞，应该就是分化后的破骨细胞，他的前体细胞，之所以称为前体，是因为他还不具备破骨细胞的特性，特征。而分化后，很少见具有前体细胞特征得细胞，那还可以说：在分化以后的前体细胞还是前体细胞吗？如果细胞不是多核的，那么看见图片的多核现象，又是为什么呢？
我是食品专业的，初次接触细胞方面，恳请多多指点！如果想法有偏差，也请及时帮忙纠正，谢谢了！
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发表于 2011-12-18 15:41 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

Okey, here are the points: mature osteoclasts (OCs) are TRAP postive giant cells with multi-nucei. They share common origin with monocytes/macrophage lineage. In vivo, in bone microenvironment, or in vitro, under suitable conditions, OCs progenitors will be turned into osteoclasts. In the process of differentiation, people usually call monocleated TRAP positive cells as pre-osteoclasts, or osteoclasts precursors.

Hope this would be some help.
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发表于 2011-12-18 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
谢谢指点。可是按照英文所述，那么如何区别破骨前体细胞 和破骨细胞呢？ 活性相同，都是多核的。我看过一篇Science Direct文献，上面说破骨细胞前体是单核的，只有和一些因子，诸如RANKL. 1,25-(OH)2D3等结合是才会分化为多核细胞。 真有些搞不清楚了。
我想请问大俠，如果我想做MTT，那么用胰蛋白酶能消化下来吗？要不要细胞刮刀？浓度多少？多长时间？
细胞培养6-8天时，是破骨细胞呢？还是前体 ？
谢谢大俠一直帮助！
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发表于 2011-12-18 15:42 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

In the first place, I would like to clarify that all the points I listed at 2007-02-06 13:15 are my opinions. Of course, some of fresh cells you isolated are mature osteoclasts, however, there must be many cells which are at pre-osteoclasts (mononuclear cells) stage, although they are TRAP positive too.

In the second place, from my point of view, you can employ both methods to isolate cells from the bones. But, if you isolate cells by using trypsin, the cells may need longer time to recovery.

In conclusion, the cells you harvested will not be pure mature osteoclasts.
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发表于 2011-12-18 15:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

那么如果获得的成熟破骨细胞不纯的话，对下一步试验，诸如MTT，骨片吸收，以及进一步检测RANKL的mRNA会不会影响呢？
我看到文献说，破骨细胞的寿命在10天左右，可是我的细胞能够存活15天左右，可能大概就是你所说的原因。那么如果我想做进一步的实验，我该培养多少天时采用呢？
还有请您指点有关MTT试验，用胰蛋白酶能消化下来吗？要不要细胞刮刀？浓度多少？多长时间？
感谢指点!期待您的回帖！
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园丁##[使用道具]
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 小中大

To anwser your questions:

(1) I do not think RANKL mRNA is expressed in osteoclasts. Please double check. To my knowledge, RANKL is expressed in osteoblasts, activated T-cells and activated synovial fibroblasts. Osteoclasts only express RANK.

(2) I do not know how to anwer other of your questions because I do not know the aims of your study. But, you could use the cells once they attached.
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