小中大消化的方法和程序不同的文献不完全相同。主要的是消化酶的不同。当然有弹性蛋白酶、分散酶那是最好的了。如果你的老板--建议用后两者。我在实验中0.25%和0.1%的胰酶(15-20min)我都试过,效果区别不是很大,由于目的细胞含量不多,加之没有鉴定的方法,也没有进行培养,不好评论。
对于这个实验,我有一下体会,或许对你有帮助。
(1)消化过程在倒置显微镜下观察下进行。
(2)消化时间不能太长和过于强烈,导致细胞活性下降。消化结束后去掉消化液,经FBS终止消化后,用摇床摇使目的细胞脱落下来。
(3)用胰酶浓度过大,炎性细胞的Fc受体损伤,不宜于用IgG包被的方法纯化。
(4)BCIP/NBT试剂盒(100×)我用的是中杉金桥的,按使用说明书操作,是否浓度过高是脱片的原因待排除。分装我考虑过,但量不多,不结冰,冰箱旁吸取,动作快一点,影响可能不会很大。我暂时没分装。师兄确认需要分装,不妨告诉我。谢谢
彼此交换一个经验,我们每个人都会有2个。