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标题:[讨论帖]再谈细胞培养基ph值的调节

duoduo[使用道具]
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发表于 2011-12-30 11:26 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们实验室没人这么干，主要原因是我们实验任务繁多，培养基消耗速度快，所以PH改变的培养基较少，同时，我们培养基进行了50毫升的分装( 用于少量使用或消耗速度较慢的实验），还可以减少污染。对于楼主的问题，我个人觉得，不要使用HCl，因为不知道HCl对于细胞本身有无危害，其次引入cl-离子会不会产生其他问题等等
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西子[使用道具]
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发表于 2011-12-30 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室没人这么干，主要原因是我们实验任务繁多，培养基消耗速度快，所以PH改变的培养基较少，同时，我们培养基进行了50毫升的分装( 用于少量使用或消耗速度较慢的实验），还可以减少污染。对于楼主的问题，我个人觉得，不要使用HCl，因为不知道HCl对于细胞本身有无危害，其次引入cl-离子会不会产生其他问题等等

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我以前分装的是250ml，现在分装为100ml了
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BUK[使用道具]
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发表于 2011-12-30 11:27 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室也是使用100ML的瓶子分装的，也是为了避免污染。
怎样能保证培养液pH值啊，只要能保证一周基本不变就可以？
有没有培养肠上皮细胞的群友啊？
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sunnyB[使用道具]
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发表于 2011-12-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我的理解是：可以加。但是一定要控制量，不要加进去过多造成原来成分的稀释。我们做胚胎培养液时候是这样的。
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西子[使用道具]
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发表于 2011-12-30 11:28 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
记忆中以前看的帖子，用的最多的好像是NaHCO3调的，但是没有战友把NaHCO3得浓度和配方以及灭菌方式跟大家分享的。
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发表于 2011-12-30 14:11 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我用的是二氧化碳调PH值
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发表于 2011-12-30 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

个人认为是可以用Hcl调pH的，不过调节后没有缓冲能力，如果放的时间长的话还是会变碱，并且加入的量不宜过多，以免引入的cl离子对细胞的影响。
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发表于 2011-12-30 14:43 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

我们就是按照配方,用NaHCO3,整袋DMEM或1640,从来没用过盐酸，也基本不调PH值，滤器滤完PH值就是正常值。一般三个月内用完细胞没问题的。
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发表于 2011-12-30 14:44 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大
我们实验室的经验：
干粉的培养基，按照包装袋上说明要加的NaHCO3的量，一般配好的是偏酸（因为使用的是优普的纯水机，过滤导致水偏酸），加入NaOH调整pH7.2~7.4，有时候是7.4~7.6。
过滤除菌，200ml分装储存，临用前加血清（加血清会使得培养基略微偏酸，pH约为7.4左右）。如果一个月内用完应该不会发生明显变碱的事情。
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发表于 2011-12-30 14:45 资料 个人空间 短消息  加为好友 

 小中大

细胞培养基的pH调解中最好不要添加其它的物质，因为有可能会明显改变培养液的渗透压，特别是溶于强酸或强碱中的物质，以免影响培养基的缓冲能力。培养液的渗透压是一个非常重要的因素, 细胞通常可耐受260mOsm/kg ～320 mOsm/kg。一般要用碳酸氢钠调节pH值，NaHCO3 为另外添加，若将NaHCO3 粉末直接加入液体培养基中会造成pH 之误差，或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3 粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH 易发生改变。加入NaHCO3 0.75g～1.00g调节PH值至7.0，定容1L，加入1g NaHCO3的培养基 pH约为7.0--7.2，此时就不需要再调节pH值了。
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